动物造模,药效评价,肾小管间质纤维化 z-bio 2024-07-08 133

　　【造模机制】结扎肾静脉导致肾缺血、肾小管损伤，出现缺血性萎缩和肾小管消亡，肾间质增生，出现肾小管间质纤维化((tubulointerstitial fibrosis,TIF)。

　　【造模方法】选用Wistar大鼠，体重200～250g。8.5％水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉。局部剃毛后常规消毒铺孔巾，沿腹正中线切开皮肤至腹腔，分离左肾静脉，用4-0号手术缝线结扎。分别于手术后第5、10、15、20和25天处死大鼠，重点观察结扎侧肾脏。处死前，将大鼠置于代谢笼中，留24小时尿液，检测尿常规。取股动脉血检测Cr含量。双侧肾脏经10％中性甲醛液固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm厚切片，分别进行H&E、PAS、PASM和Masson染色。

　　【模型特点】

　　1．病变典型稳定，手术侧肾脏的病变与人TIF的病变相似度极高。通过动态观察，病变早期组织学改变以肾小管上皮变性萎缩、间质淤血、水肿为主，间质可见单核细胞浸润、Ⅲ型胶原增生。中晚期肾小管萎缩和消亡，小动脉管壁增厚，肾间质成纤维细胞增多，胶原沉积，Ⅰ型胶原增生。整个病程中，肾小球可见缺血性改变。

　　2．周期短，操作方法简单，只需分离肾静脉并结扎即可，手术过程只需20分钟。单侧肾脏手术，对侧肾脏不受损伤，所以对动物的生活影响轻微。实验周期短，术后第10天即可形成较理想的肾小管间质纤维化病变。

　　【模型评估和应用】结扎肾静脉造模法是一种方法简单、成功率高、病变稳定，与人类病变极为相似的肾小管间质纤维化动物模型造模方法。该模型克服了其他模型存在的不足，常见的方法包括单侧输尿管结扎法、肾次全切除法、免疫介导法、庆大霉素肾小管损伤法、腺嘌呤致纤维化法、放射损伤法、感染等，每一种方法均有各自的不足之处。其中药物诱导如环孢素肾炎、多柔比星肾炎等方法，虽然操作简单且成功率高，但成本高、实验周期长、间质变化较轻。肾次全切除可以造成TIF病变，但操作复杂，对动物创伤较大。免疫介导的肾炎模型通过延长致病周期虽然可以得到TIF病变。但获得的结果不稳定。腺嘌呤致纤维化模型病变虽然稳定，但是需要每天按照动物的体重配药灌胃，操作繁琐，周期也较长。庆大霉素肾小管损伤模型以肾小管上皮急性坏死再生为主，间质纤维化不明显。单侧输尿管结扎模型通过尿液潴留压迫损伤肾组织导致间质纤维化，时间一般控制在15天左右，如果延长时间，肾实质受挤压变得过薄，到第15天时，间质纤维化病变不明显。