动物造模,药效评价,脑损伤 z-bio 2024-09-20 230

　　(1)复制方法  健康大鼠，雌雄不限，体重为300～350g。

　　1)落体撞击装置

　　①有机玻璃管：长为2m、内径为19mm、外径为26mm的有机玻璃管，3点固定于墙上，其下端距地面15cm，以放海绵床和大鼠。并在管壁上每10cm钻一直径为5mm的小孔，对应两排，以减少空气阻力。

　　②打击垫片：直径为10mm、厚为3mm的圆形不锈钢片，用以制作弥漫性轴突损伤模型，另一种在其不锈钢垫片距中心2.5mm处钻一直径1.5mm的小孔，置入一不锈钢圆柱，使之高出垫片平面3mm以制作弥漫性脑损伤同时合并局灶性脑损伤动物模型。

　　2)脑损伤的方法  大鼠经腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)或戊巴比妥钠(按50～60mg/kg体重的剂量)麻醉。手术区域皮肤消毒，行气管插管，呼吸机辅助呼吸。股动脉插管以记录动脉压，并监护心电、血压、脉搏、呼吸等变化。将大鼠俯卧固定于一已知弹性系数的海绵床上，移至有机玻璃管下端，垫片正对有机玻璃管中央，有机玻璃管上方置一滑轮，在铜柱上端系一小绳，将滑轮调整至绳索跨过滑轮后铜柱处于有机玻璃管中央为止。待动物开始苏醒，有肢体活动时，将400g重铜柱由1m高处自由坠落于不锈钢垫片上，立即移开海绵床以免再次损伤，将大鼠移至手术台上接呼吸机给以呼吸支持。观察打击中及打击前后动物的呼吸、心率及血压。记录肢体活动、尿失禁、瞳孔改变及神经系统体征。敲击后可选取3～24h间的时间段，快速断头取脑，记录蛛网膜下腔出血及肉眼所见的脑挫伤情况。并将全脑浸泡于甲醛液中24h，固定好的脑作冠状切片，层厚2mm HE染色。也可作心脑灌注，分别取左右顶叶皮层、海马、胼胝体、脑干等组织，处理后超薄切片，进行电镜观察。

　　(2)模型特点  敲击后动物的死亡率在25％左右。

　　1)一般症状  伤后所有动物表现为竖毛、尿失禁、四肢抽搐、单侧或双侧瞳孔散大、呼吸抑制等症状。血压立即出现平均动脉压上升，然后是一段时间的低血压，并在30～60min内恢复到伤前水平。心率迅速减慢，10～15min后逐步回升至伤前水平。

　　2)大体病理变化  所有创伤鼠均见明显、广泛的蛛网膜下腔出血，伤后3h胼胝体、小脑上臂、脑干等处可见散在的点片状出血灶，呈现弥漫性的脑损伤。低倍镜下HE染色后见有明显的蛛网膜下腔出血，伤后1h脑干免疫组化染色切片上发现有一定数量的轴索肿胀变粗，同期HE染色未显示轴索的变化；伤后3、6、12、24h鼠脑免疫组化染色显示皮层下、胼胝体、脑干等处出现大量的轴索损伤的进一步改变，如分叶状肿胀、内折以及轴索断裂后形成的末梢球和回缩球。神经元胞体肿胀、胞核浓染、胞浆浅染、尼氏体减少。

　　3)电镜观察  可见索髓鞘出现分离肿胀、内折，轴索内神经微丝紊乱、横断面见微管减少。髓鞘纤维常呈节段性变性膨大，神经微丝排列混乱和变性融合，髓鞘板层松散洋葱样变。部分树突也有不同程度的肿胀，透亮和空泡变，胶质细胞内可见线粒体肿胀，神经突触前后膜明显增厚。

　　(3)比较医学  临床上闭合性颅脑损伤主要表现为弥漫性的脑损伤，本模型模拟外力所致脑损伤的特点，给予一个外界定力敲击，使得动物的主要生命指征均发生了明显的变化。且广泛的颅内出血，神经组织的大面积损伤，神经细胞的病理学改变等，均类似于人类闭合性颅脑损伤的弥漫性损伤的特征。而且一个固定的外力敲击，动物的损伤程度相似，重复性好，利于损伤后病理演变过程的研究和治疗结果的判断。