动物模型,肝衰竭 中国实验动物信息网 2020-08-07 847

　　（1）模型方法以100mg/kg体重的腹膜内注射乙醚或氯胺酮麻醉成年大鼠，固定在背部，沿经腹切口切开腹部。用电凝剂烧灼腹壁血管以止血。暴露肝脏，切下镰状韧带，冠状韧带和叶间韧带，暴露肺门裂孔，首先结扎，切除门皮头皮分支的腹胆管，然后将其附着在门皮头皮分支上暴露出肝动脉，并以5-0结扎头皮分支和门静脉。具有肝动脉。然后将右门分支小心地分成上叶和下叶以及相关的肝动脉，并用5-0丝结扎门静脉的右或右分支。可见结扎的肝叶处于缺血状态。用5.5号针扎扎结扎穿刺门静脉，并以10 ml/kg体重注射5％葡萄糖氯化钠溶液或林格氏乳酸林格氏溶液，直至肝叶变白，然后迅速用5-0丝结扎并清除肝脏。叶。总共去除了85％-95％的肝组织。确认出血后，缝合腹壁切口。术后观察大鼠的精神状态，活动状态，肝功能变化及12小时生存率。手术后，老鼠醒来并跌落，这是成功手术的标志，但是那些未能醒来，站起来并在12小时内死亡的人则被认为手术失败。或者，通过腹膜内注射30 mg/kg体重的巴比妥钠麻醉健康的仔猪。麻醉右上肢，建立右上肢，使用鼻插管供氧，固定仰卧位，并使用上中线腹部切口逐层层叠腹部，连接门静脉和右肾静脉。打开。向门静脉注射0.25 mg肝素，取一个装有2％肝素盐水的硅胶塑料管（长15 cm，直径0.8 cm），从右肾游离静脉的远端插入下腔静脉。插管2-3厘米并固定。从门静脉的近端到远端插入并固定约1.5 cm后，打开旁路管，并确认没有明显的出血后，关闭腹部。 2天后，进行第二阶段手术，进入腹部后，切掉所有肝周韧带（包括左，右三角韧带，冠状韧带，镰刀形韧带，肝胃韧带），并缝合肝动脉的肝分支，结扎肝动脉和胃。十二指肠动脉完全阻断了人类肝脏中的血流，并且通过股动脉导管术监测了血压。在完全阻断流向肝脏的血流后的1、4和7小时，取出小块肝组织并分别用10％甲醛和0.25％戊二醛固定。然后合上腹部。在手术过程中，给实验猪静脉注射500 ml平衡盐溶液和800,000 U青霉素，死后进行尸检并收集和检查肝脏样本。建模过程允许动态观察模型动物的一般状况和死亡率，同时抽取全血以制备用于生物化学的血清。建模后，处死动物并收获肝脏以进行组织形态学检查。

　　（2）模型特征：手术后大鼠可以很快醒来，起身走动。然而，在1至2小时后出现肝功能衰竭，肝昏迷无动于衷，curl缩，大鼠毛发秃顶，尿液活性降低，黄色尿液，拒绝喝酒或进食。进行了85％肝切除的模型动物的12小时生存率为93％，并在48小时后全部死亡。进行了95％肝切除的模型动物的2、4、6、12小时生存率分别为92％，75％，58％和50。 ％，所有人都在24小时内死亡。模型仔猪在完全阻断人肝中的血流后的12至16小时内死亡。手术后十二小时，丙氨酸氨基转移酶（ALT），血氨（NH3）和总胆红素（TBIL）的水平升高，而血糖（GLU）的水平降低。仔猪肝血流受阻后，丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST），总胆红素（TBIL），Amm，尿素氮（BUN），肌酐（CRE），凝血酶原时间（PT）逐渐增加，白蛋白（ALB）和纤维蛋白原（FIB）逐渐减少。手术后12小时处死大鼠时，剩余的肝组织为暗红色，囊肿，表面出血。在显微镜下，肝小叶的结构被破坏，肝细胞广泛变性和坏死，细胞质疏松，炎性细胞渗入坏死区域，肝脏的窦道扩大，它显示为网状，并且可以看到充血和出血。模型仔猪肝脏血流完全阻断1小时后，肝小叶结构和肝细胞排列仍正常，Disch间隙略微增大，肝细胞混浊肿胀。但是，核包膜和核仁仍然很清楚。 4小时后，仍存在通过光学显微镜确认的肝小叶结构，肝细胞排列无紊乱，存在肝板结构，肝脏之间的空间大大扩大，中心静脉电镜下可见塌陷，肝内液泡变性，核缩小，核仁消失，细胞质糖原颗粒均质化，内质网粗颗粒脱粒，线粒体水肿，模糊Cryste，线粒体溶解，细胞间胆管微绒毛明显减少，核染色质积聚，核畸形和核假包涵体形成。 7h后镜检查显示肝小叶结构紊乱，肝细胞排列紊乱，肝板解离，更明显的空间扩张，浑浊肿胀和肝细胞质液泡变性更明显，核染色质边缘聚集，并且缺少一些肝细胞膜，显示出裂解和坏死的迹象。立即通过肝组织显微镜检查观察肝衰竭和死亡时，无法识别模型猪的肝小叶，观察到肝细胞丢失，错位，肝板解离和狄利克雷特间隙的扩大，肝脏和斑点广泛。看到了补丁。细胞坏死。

　　（3）比较医学急性肝衰竭是由多种因素引起的弥漫性严重肝细胞坏死和/或突然严重肝损害的综合征。患者死亡率可高达75％。病因主要由肝炎病毒引起，也可能由一次或多次伤害，药物或有毒的过量引起。当前，急性肝衰竭的动物模型主要有两类：手术和药物毒性肝损伤。其中，全肝或部分肝切除是*经典且*常用的建模方法。尽管完全肝切除术无疑会导致肝功能衰竭，但该模型的特点是临床急性肝病，例如病程不可逆，肝昏迷短，循环损伤或肝细胞死亡。它离失败的病理过程还很远。结果，有毒物质被连续释放，并且肝功能异常仅在模型动物死亡前2至4小时出现。鉴于这些缺点，人们研究并建立了替代部分肝切除的急性肝衰竭动物模型。在正常情况下，具有正常肝功能的动物可以耐受不到70％至75％的肝切除。肝切除超过75％时会发生致命性肝衰竭。如果肝切除超过85％，则需要进一步治疗。门转向一个洞，几乎100％的动物在48小时内死亡。在该模型中，进行了部分肝切除术以去除85％至95％的肝组织。 6至12个小时后，动物的肝脏和肾脏变得异常，逐渐恶化，并逐渐出现肝昏迷。组织学检查显示肝小叶结构受损，肝细胞减少，肝片解离，Disse空间明显扩张，局部和点状广泛肝细胞坏死，所有动物他在手术后24-48小时内死亡。与全肝切除模型相比，部分肝切除具有更接近临床的生理和病理特征，并且可能会逆转。例如，在90％接受肝切除的大鼠中，在手术前连续3天进行脾细胞肝内移植，其中40％的模型存活时间可能超过28天。迄今为止，人们已经成功地在包括大鼠，兔子，狗和猪在内的多种动物中复制并建立了部分肝切除模型。其中，小动物模型更适合研究急性肝衰竭对病理生理和药物干扰过程的影响，而大动物模型已习惯于评估人工肝技术的有效性和安全性。由于全肝切除术导致的肝衰竭的动物模型具有独特的优势。复制周期短，可以量化肝切除术，并且剩余的肝组织没有特定的病理变化。与动物症状相关的血液指数变化与肝衰竭的临床表现相一致。该模型是可复制且可靠的。出色的稳定性和高成功率。