动物模型,诱发肝硬化 中国实验动物信息网 2020-08-07 931

　　（1）生殖方法通过在脐部的腹部区域进行中线切开来麻醉成年大鼠，并在距肝门1cm处用7-0丝线缝合胆总管，它将在手术后存储2-8周。在此期间，观察动物的一般活动和身体体征，并从眼窝动态收集血液以收集丙氨酸氨基转移酶（ALT），总胆红素（TBIL），碱性磷酸酶（ALP）和透明质酸。小心准备含（HA）含量的血清进行检测。建模后，取肝称重。切开后，取一块组织并准备匀浆以测定羟脯氨酸（Hyp），总蛋白（TP），丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量，一些组织用嵌入常规石蜡的10％甲醛溶液固定，切片用HE或Masson染色，一些组织用4％戊二醛和1％四氧化os，618环氧固定。用常规方法包被树脂。准备包埋，超薄切片机，铀铅双重染色的切片，并使用光镜和电子显微镜进行组织学检查。

　　（2）该模型的特点是，经过5周的建模，模型动物的肝脏和脾脏的湿重及其系数显着增加，血清ALT，TBIL，ALP，肝组织Hyp，MDA升高，肝组织TP和SOD降低。光学显微镜检查显示，在术后1至2天，模型动物的肝组织中逐渐散布着变性，坏死和炎症细胞浸润，这在3天时非常明显。与上述变化同时，在门静脉区域的小叶周围出现小胆管样上皮细胞，在小叶中逐渐扩大，扩展和加深，小叶变成花状。在第35天，小胆管及其相关的成纤维细胞，胶原纤维，毛细血管形成了一个膜状空间，该空间相互连接，封闭并邻接增生性空间，直到形成假小叶。将被拆分。在电子显微镜下，在手术后的第1天和第2天，小叶周围的单个或少数2-3个肝细胞显示弥漫性萎缩和变性，具有浓缩的细胞核和密集的细胞质。 ，细胞器在第三天变性并溶解。见坏死和炎性细胞浸润，吞噬细胞组装。与肝细胞的变性和坏死同时，小胆管样上皮细胞在小胆管周围出现并增殖，小泡结构的基侧具有基底膜和胶原纤维层。在一两周内，小的胆管样上皮细胞进一步生长，逐渐发展并从小叶周围扩散，并沿着肝细胞线向小叶内部扩散。 3周后，胆管样小上皮细胞明显分化并进化。他们中的大多数似乎已经分化成小的胆管。上皮细胞变为立方体或扁平状，胞质中间丝增加，核膜下沉形成不规则形状。染色质在核膜下聚集，管腔扩大，微绒毛稀疏分布。胶原纤维在小胆管周围的增殖逐渐形成胶原纤维的透明层。增殖的小胆管及其相关的吞噬细胞，肥大细胞，炎性细胞，成纤维细胞，毛细血管和增殖的胶原纤维一起形成了肝细胞之间的分隔。也有一些小的胆管样上皮细胞分化并演变为肝细胞，以及以囊泡形式的过渡细胞和肝细胞。它们通常包裹在一层透明的胶原纤维中，形成小的肝细胞结节。在8-12周时，他表现出典型的胶原纤维增生和肝细胞结节。            （3）比较医学肝外胆管梗阻引起胆管扩张，胆汁淤积和梗阻部位上方胆管压力升高，引起肝内胆管扩张和破裂，从而导致肝细胞缺血和坏死。引起并*终发展成胆汁。肝纤维化和肝硬化。普通胆管结扎可完全阻断模型动物的胆管，阻止胆汁排泄，在胆汁中积累，诱导肝脏中自由基的产生，细胞膜脂质过氧化（MDA升高， SOD降低），导致细胞结构和膜受损。通透性增加和细胞代谢失衡。脂质过氧化引起连锁反应，加剧肝细胞损伤和坏死（TP降低）。大量肝细胞的缺血和坏死诱导小胆管样上皮细胞的出现。后者通过一种多能干细胞增殖，并可能具有增殖和分化功能。在肝损伤，肝实质坏死的情况下，小的胆管样上皮细胞分化，而它们演变成囊泡或结节性肝细胞。另一方面，合成胶原参与胶原纤维的生长（增加Hyp），从而加速肝硬化的形成和发展。该模型可以更好地模拟长期胆汁淤积引起的人类肝纤维化和肝硬化的过程和结果。该建模方法简单，周期中等，可重复且成功。目前，除大鼠，兔子，狗，猴子和其他具有胆总管结扎引起的胆汁性肝硬化模型的动物外，已经成功并在国内外广泛使用。