反转录病毒载体感染法 中国实验动物信息网 2020-10-14 467

　　ES细胞的原核注射和基因靶向在小鼠中已经非常成功，但是这些方法在其他物种中还没有非常成功，这促使科学家们寻找其他替代方法。研究表明，逆转录病毒，特别是慢病毒载体，可以有效地将外源DNA引入卵细胞。逆转录病毒载体的基本结构：逆转录病毒载体的两端都有长的末端重复序列（LTR）。
　　LTR包含可以转录和表达外源基因的启动子和增强子序列。在逆转录病毒载体的5'LTR序列后，有病毒包装信号，包装蛋白基因被去除，剩余空间可用于克隆外源基因。逆转录病毒载体的克隆能力受到限制，插入的DNA片段必须小于10 kb。将包装蛋白基因克隆到表达载体中以制备包装细胞系。逆转录病毒表达载体用于转染包装细胞系或与病毒包装载体共转染以制备病毒颗粒，然后病毒上清液用于感染胚胎或ES细胞。让我。由于带状疱疹构成了物理屏障，并且不能直接感染结合物，因此可以将重组病毒的上清液注入带状疱疹和祖细胞膜之间的空间，或者先去除带状疱疹。然后，它可以感染没有带状疱疹的连接细胞。您也可以使用显微镜。注入操作系统，并将病毒上清液注入胚泡腔，以感染早期胚胎。胚胎被转移到受体动物的输卵管，并成长为转基因动物。病毒感染后，逆转录病毒RNA基因组被释放到苏丰细胞中，病毒RNA在逆转录酶的作用下被逆转录成DNA，并在病毒整合酶及其末端特异性核酸序列的作用下随机整合到宿主中。将会。细胞基因组。小鼠白血病逆转录病毒（MMLV）感染可用于早期制备转基因动物，然后进入动物基因组后发生MMLV介导的转移基因，即基因表达沉默。发现。*近，已发现慢病毒介导的转移基因在动物中更稳定。逆转录病毒载体感染方法转基因方法易于操作，宿主范围广，不受胚胎发育阶段的影响，不存在导入基因的连续现象，并且整合单个位点和单个拷贝具有很高的整合效率。
　　这种方法的缺点是需要生产含有外源基因的逆转录病毒。外源基因的插入长度是有限的。逆转录病毒整合仅在分裂的细胞中发生，而重组慢病毒可用于感染非分裂的细胞。许多转基因动物模型，包括阿尔茨海默氏病的转基因大鼠模型，已成为受慢病毒载体感染的受精小鼠卵。