什么是胚胎干细胞法？

胚胎干细胞法

中国实验动物信息网

2020-10-14

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　　马丁·埃文斯研究所（Martin Evans Institute）已成功地从早期胚胎的内部细胞团中成功培养出了多能干细胞系，它可以在体外生长，即使重新注入胚芽囊肿，也可以分化为其他细胞，这些细胞（包括生殖细胞）被称为胚胎干细胞（胚胎干细胞，ES细胞）。 ES细胞可以在体外长时间培养，以保持未分化状态，并修饰和筛选其基因组。

　　接下来，将获得的ES细胞克隆注入盾片囊中，并将ES细胞整合到早期胚胎中以参与胚胎发育以及各种组织和器官。如果它参与睾丸发育并形成源自ES细胞的精子，则遗传变化可以传给下一代以获得基因敲除或转基因动物。 ES细胞中产生的*个转基因动物是被逆转录病毒载体感染的转基因小鼠。 ES细胞主要用于基因靶向以产生基因敲除小鼠。小于50 kb的转基因通常不需要ES细胞方法来生产转基因动物，但是ES细胞途径是大型基因（50-400 kb）或非常大的基因（50-400 kb）或非常难以显微注射的非常大的基因。对于400kb-3Mb尤其重要）。

　　例如，可以将诸如TCR和Ig基因之类的大基因克隆到具有800-3000 kb位点的YAC载体中，而转基因小鼠的制备通常需要ES细胞和YAC细胞融合。 Es-酵母细胞融合方法：该技术是制备超大基因转基因动物以及许多超大片段YAC DNA转基因动物的重要方法，例如免疫球蛋白和TCR基因座转基因小鼠。用于制造小鼠。该方法不需要纯化YAC DNA。 DNA的大小没有明显限制。您可以通过融合方法转移500-2000 kb的DNA。酵母细胞膜具有坚硬的细胞壁，用酶消化细胞壁后，形成原生质球，并通过PEG融合方法与哺乳动物细胞（小鼠ES细胞等）融合，将YAC基因导入动物细胞。我可以。酵母DNA和YAC DNA可以同时转移到小鼠ES细胞基因组中。大的完整YAC DNA片段向ES细胞基因组转移的效率非常高，具有完整YAC DNA的ES细胞克隆的比例接近95％。当YACDNA被转移时，一些或全部酵母染色体也被转移到小鼠基因组。酵母基因组通常不在哺乳动物细胞中表达，并且不影响ES细胞的多能性或小鼠胚胎发育。

　　您可以介绍Transgene。下一代。*近，通过用转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc对细胞进行重编程，已经可以诱导小鼠胚胎成纤维细胞产生多能干细胞（iP）。 ..通过称为四倍体囊肿互补的过程，iPS细胞已用于生产活小鼠。尽管仍处于自己的发展阶段，但这项技术有潜力为从体外转基因的胚胎成纤维细胞生产转基因动物提供强有力的途径。 ES细胞被认为是转基因动物，核移植和基因治疗等研究领域中的新测试材料，具有广泛的潜在应用。然而，尚未从动物如牛，绵羊，猪和鸡中分离出ES细胞。当前，使用ES细胞生产转基因动物受到两个条件的限制，并且可以用更好的方法代替。首先，目前仅小鼠ES细胞是可商购的，并且已经报道了来自其他动物的ES细胞。例如，已经成功建立了大鼠ES细胞以产生P53基因敲除大鼠。其次。即使在ES细胞中，嵌合体也必须在繁殖过程中繁殖，因此对小鼠而言，这不是一个大问题。当将其应用于繁殖周期长，饲养成本高的其他牲畜时，会出现某些问题。当然，ES细胞是出色的核供体，易于用于存储和动物克隆。