动物造模,药效评价,骨缺损修复 z-bio 2024-09-18 17

　　种植修复已越来越广泛地应用于临床实践中，但牙齿因外伤、肿瘤、牙周病等原因缺失后，常伴随牙槽骨的过度吸收，造成骨量不足，限制了种植义齿的适用范围。王荣等利用中国实验用小型猪，将骨髓基质干细胞与羟基磷灰石及磷酸三钙的复合体结合，形成生物材料复合体，联合应用于种植体周围骨缺损中，分析种植体周围骨缺损的组织再生特点。

　　实验步骤：①骨髓基质干细胞的提取及诱导分化培养：在小型猪的髂前上棘处无菌抽取骨髓5～7ml置于肝素化的离心管中。应用密度梯度离心法，以含10％胎牛血清的α-MEM的培养液悬浮细胞，接种于培养瓶，置于CO2培养箱中培养，24小时后细胞贴壁，当细胞融合至80％时进行消化传代，取第二代细胞备用。②BMSC的鉴定：将培养第七代已经纯化的BMSC消化计数。在离心管中加入100μl细胞悬液，含细胞数1×106。加入200μl PBS，以1000r／min离心5分钟，加入200μl PBS重悬细胞，加入FITC标记CD71、CD44、CD34、CD45单抗，室温、避光反应1小时，多聚甲醛固定，流式细胞术检测。③细胞与支架材料复合培养：调整细胞浓度为1×106／100μl，置入装有羟基磷灰石-磷酸三钙载体材料的培养液中，轻轻摇晃，标准条件下培养，7天后待用。④种植体周围骨缺损及修复：在种植床近中壁制备直径3mm、高5mm的圆柱形骨缺损。各组分别植入BMSC-HA／TCP复合体，HA-TCP材料(80％的磷酸三钙与20％的羟基磷灰石)，表面覆盖Cellfoam膜，严密缝合。将8头小型猪随机分成细胞-支架组和支架组，每组4头，在种植体植入后1个月、3个月各组处死2头动物。分别取材，制作骨磨片，进行甲苯胺蓝染色，组织学观察。

　　实验结果：细胞-支架组种植后1个月在近中骨缺损区可见新生骨形成，甲苯胺蓝染色呈现艳蓝色，可见排列整齐的成骨细胞以及编织骨，显示有活跃的成骨活动。3个月组可见已形成良好的骨结合，以密质骨为主，骨质主要由成熟的包含大量哈弗系统的密质骨构成。可见支架材料大部分降解被新骨替代，并有血管长入材料间隙中，未发现明显的炎症反应。有小梁骨形成及哈弗系统结构。支架组种植后1个月骨缺损区，可见支架材料与种植体明显间隙，3个月支架材料逐渐降解，未见新骨生成。