动物造模,药效评价,慢性胃溃疡 z-bio 2024-08-26 73

　　(1)复制方法  BALB/c小鼠，SPF级，5～7周龄，禁食12h，麻醉开腹，于胃大弯窦部后壁处，将带有腐蚀性药物的2号手术棉线(置15％石炭酸和25％醋酸溶液中浸泡)横穿于胃壁，两针点孔相距1～1.5rnrn，剪断棉线，按手术要求关闭腹腔，缝合皮肤，2h后恢复正常给水和进食。次日，禁食12h和腹腔注射雷尼替丁0.25mg/只后4h，灌胃给经微生物学和PCR鉴定的Hp菌液14×100000000CFU/只，于灌服Hp后不同时间，颈椎脱臼处死，取胃窦部黏膜，匀浆，作细菌克隆生长观察，行尿素酶和PCR鉴定，取部分胃黏膜组织，采用光镜和电镜技术进行检查。或蒙古沙土鼠(Mongolian gerbil，MG)，8周龄，禁食禁水12h，灌胃给50％乙醇0.3ml/只，之后继续禁食禁水，次日灌胃给1000000000000CFU/L Hp菌液0.5ml/只，上、下午各1次，隔日上午再灌胃1次。或SPF级6周龄MG，禁食禁水24h，皮下注射消炎痛20mg/kg体重，6h后灌胃Hp菌液0.5ml/只，再禁食4h，如此连续灌胃3d，1次/d。12周时，断食断水24h，眼球放血，分离血清， ELISA检测抗Hp抗体，同时开腹取胃，沿胃大弯剖开，用生理盐水轻轻洗去胃内残留物，肉眼观察胃黏膜大体情况，然后一半黏膜组织进行培养、涂片及快速尿素酶纸片试验，另一半黏膜组织用10％甲醛固定，作组织病理学检查。

　　(2)模型特点  模型小鼠在其胃大弯窦部黏膜下挂上带腐蚀性药物的棉线2周时，胃窦部出现溃疡，直径在1～2.5mm等，局部胃黏膜腺体缺损，有纤维索性物质渗出，黏膜下可见炎症细胞浸润。同时，胃黏膜经Hp条件培养基培养3d后可见乳白色菌落生长，其菌苔尿素酶试验呈阳性， PCR反应显示有特异性的DNA扩增条带。72d时，电镜观察发现胃黏膜有带鞭毛的螺杆菌。乙醇加Hp感染12、24周，约37％模型MG胃组织黏膜可见明显出血、慢性活动性胃炎及溃疡等病变，有时溃疡可深达肌层，同时，在胃窦、幽门部及胃体部黏膜上皮细胞表层黏液、胃腺窝中以及上皮细胞间可明显见到大量Hp存在，Hp感染率达到100％。消炎痛加Hp感染12周，模型MG胃组织黏膜可见大量炎症细胞浸润，黏膜层和黏膜下层有大量淋巴滤泡形成，约1/3动物胃窦部可看到胃溃疡的出现。

　　(3)比较医学  研究发现，Hp感染与胃溃疡的形成和发展有着密切的关系。Hp对胃型上皮有着某种亲和力，可快速通过黏液层，穿透上皮细胞间的紧密连接，致使黏膜内炎症细胞浸润，表面上皮细胞破坏，黏膜抵抗力下降；Hp释放的细胞外蛋白酶，可裂解黏液糖蛋白的聚合结构，使黏蛋白不能形成胶体，破坏了黏膜屏障的完整性；Hp分泌的大量尿素酶，可快速分解尿素产生多量的氨，后者可使上皮细胞周周环境改变，pH升高，H+从胃底腺进入胃腔受阻，H+逆扩散而致胃溃疡易于形成。此外，Hp还可以产生一些趋化炎性的细胞因子如脂多糖，使慢性炎症黏膜更易受到胃酸的损伤。虽然人类自然感染Hp者比率相当高，但将人源性的 Hp通过灌胃定植于小型实验动物体内却相当困难，这不仅因为Hp定植质量与动物宿主特异性有关，同时还与动物等级及Hp菌株侵袭力相关。相对而言，定植比较容易的小型动物是沙土鼠，动物级别是无菌级或SPF级，Hp菌株是高侵袭力株，后者指通过临床分离筛检和动物体内驯化而获得的毒力高、动力大和黏附性强的菌株。在本模型复制过程中，预先腹腔注射雷尼替丁，其目的是升高动物胃黏膜的pH值(其平均值从1变成5)，使此后灌胃进入胃腔的Hp菌在尚未分解尿素及建立起抗强酸的微环境下能够存活下来，以提高Hp菌在胃黏膜内定植的能力。预先采用一定量的乙醇对实验沙鼠进行预处理，可造成胃内黏膜组织的损伤，破坏胃内环境，引起胃内菌群的生态失调，从而有利于Hp的定植。消炎痛的使用使接种Hp后的胃黏膜对Hp的敏感性增加，尽管消炎痛与Hp感染分别通过不同的机制造成胃黏膜损害，但它们共同损害某些重要的途径导致胃黏膜细胞旁的通透性增加，并使脆弱的胃黏膜直接暴露在胃酸和胃蛋白酶的入侵之下，使胃溃疡发生的危险性大大提高，二者具有协同和相加作用。