动物造模,药效评价,肝硬化 z-bio 2024-08-22 189

　　(1)复制方法  成年大鼠，麻醉后于脐上腹正中切口剖腹，距肝门1cm处以7-0号丝线缝扎胆总管。手术毕，常规饲养2～8周。期间，注意观察动物的一般活动状况和体征，动态眼眶取血制备血清作丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、透明质酸(HA)含量检测。造模结束，摘取肝脏称重，分切后取部分组织制备匀浆作羟脯胺酸(Hyp)、总蛋白(TP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量测定，部分组织用10％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片HE或马森(Masson)染色，部分组织用4％戊二醛和1％四氧化锇双固定，618号环氧树脂常规包埋，超薄切片机制备切片，铀－铅双染色，分别用光镜和电镜作组织形态学检查。

　　(2)模型特点  造模5周，模型动物肝脾湿重及其系数显著升高，血清ALT、TBIL、ALP、肝组织Hyp、MDA上升，肝组织TP、SOD下降。光镜显示，术后1～2d，模型动物肝组织逐渐出现散在性变性、坏死和炎症细胞浸润，3d时变得十分明显。在上述改变的同时，汇管区小叶周边部出现小胆管样上皮细胞，并随时间逐渐向小叶内扩展、延伸、深入，以至小叶呈花环状。35d时，小胆管和伴随出现的纤维母细胞、胶原纤维和毛细血管形成膜样间隔，并与邻近增生的间隔互相连接、包绕、分割，直至形成假小叶。电镜显示，术后1、2d，有单个或2～3个肝细胞在小叶周边部呈散在性萎缩、变性，其胞核固缩，胞浆呈致密状，细胞器退变，3d时呈溶解性坏死，并见炎症细胞浸润、吞噬细胞集结。在肝细胞变性坏死的同时，小叶周边部见小胆管样上皮细胞出现并增殖，其管泡状结构的基底侧有基底膜和胶原纤维层。1～2周时，小胆管样上皮细胞进一步增殖，逐渐从小叶周边沿肝细胞索向小叶内发展延伸。3周后，见小胆管样上皮细胞明显分化、演变，其中多数似分化成小胆管，其上皮细胞变得立方或扁平，胞浆中中间丝增多，核膜有凹陷而形成不规则形状，异染质在核膜下凝集，管腔扩大，微绒毛稀疏分布。小胆管周围胶原纤维增生逐渐形成明显的胶原纤维层。增生的小胆管及其与之伴随的吞噬细胞、肥大细胞、炎性细胞、纤维母细胞、毛细血管和增生的胶原纤维共同形成肝细胞之间的隔。还见少数小胆管样上皮细胞向着肝细胞方向分化、演变，而见管泡状的过渡细胞和肝细胞。其外经常包裹明显的胶原纤维层而形成小的肝细胞结节。8～12周时，呈典型的胶原纤维增生和肝细胞结节。

　　(3)比较医学  肝外胆管梗阻可以引起梗阻部位以上胆管扩张、胆汁淤积、胆管内压力增高，并可引发肝内胆小管扩张破裂，导致肝细胞缺血和坏死，最终发展成为胆汁性肝纤维化和肝硬化。采用胆总管结扎术，可使模型动物胆管完全梗阻，胆汁排泄受阻，淤积于胆内，诱导肝内自由基产生，引起细胞膜脂质过氧化(MDA增多，SOD下降)，导致细胞结构破坏，膜通透性增加，细胞代谢失衡。脂质过氧化又引起连锁反应，进一步加重肝细胞损伤和坏死(TP下降)。大量肝细胞的缺血和坏死，诱发小胆管样上皮细胞的出现。后者可能属于一种具有多分化潜能的干细胞所增殖，具有增殖和分化功能。在肝脏受损肝实质细胞坏死情况下，小胆管样上皮细胞一方面分化演变成管泡状或小结节状肝细胞，另一方面合成胶原参与了胶原纤维的增生(Hyp增加)，加速了肝硬化的形成和发展。本模型能较好地模拟人因长期胆汁淤积引起的肝纤维化和肝硬化疾病的过程和结果，且造模方法简单，周期适中，重复性好，成功率高。目前，除大鼠外，兔、犬和猴等动物胆总管结扎法诱发的胆汁性肝硬化模型均已获得成功，并在国内外得到了较为广泛的应用。