动物造模,药效评价,肝硬化 z-bio 2024-08-22 175

　　(1)复制方法  成年雄性大鼠，按10mg/kg体重的剂量腹腔注射0.5％二甲基亚硝胺(DMNA)，每周连续3d，1次/ d，共4周。或按100mg/kg体重的剂量腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)，首剂加倍，以后1次/2d，连续13周，或可将TAA用蒸馏水配成0.03％的溶液，作为动物的惟一饮用水，连续喂养12周。或选用成年小鼠，按250mg/kg体重的剂量腹腔注射10％D-氨基半乳糖(DGA)，1次/d，每周6次，连续6个月。造模毕，抽取全血、摘取肝脏作生化和组织形态学检查。

　　(2)模型特点  DMNA造模2～4周，血清丙氨酸转氨酶(ALT)、γ-谷胺酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)活性、血清总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)以及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量升高，白蛋白(Alb)含量降低，肝组织呈现出大面积出血坏死，炎症细胞浸染，肝窦壁细胞和纤维组织弥漫性增生，形成较厚的完全间隔和假小叶。TAA造模12周，血清生长激素(GH)水平升高，胰岛素样生长因子－Ⅰ(IGF-Ⅰ)含量降低，肝组织IGF-Ⅰ mRNA表达水平亦降低，肝组织显示，假小叶形成。DGA造模6个月，模型动物呈现出进行性胆小管增生和纤维间隔形成。

　　(3)比较医学  包括药物在内的化学物质是肝损害和肝硬化的重要病因之一。临床上，药物引起肝病的机制因品种而异，非常复杂，但主要分为直接细胞毒性和特异体质反应两种。其中前者引起的肝脏损害一般可以预见，为某些药物所特有，且与药物剂量相关，后者则仅偶尔发生于某些敏感的个体，发生与否难以预测，与剂量亦无关。如异烟肼可引起20％的患者轻度而短暂的转氨酶升高，在连续服用一年后才逐渐发展为慢性肝炎和肝硬化。所以，低剂量和长期连续使用往往是药物及化学物质引发人类肝硬化的必要前提，亦是复制肝硬化动物模型的重要步，低剂量长期应用致癌物可诱发肝硬化和肝癌。造模常用的致癌物质主要包括： DMNA，二乙基亚硝胺(DENA)，TAA等。由于肝脏是其代谢的主要器官，所以一旦进入体内，受损的机体部位主要为肝细胞。如，DMNA经微粒体转化形成强烷化物，可造成细胞内大分子损伤，急性期可导致腺泡3区的坏死和脂变，慢性则形成肝纤维化、肝硬化和肝肿瘤；其中，TAA经代谢可生成亲电子活性基团产物，后者可干扰肝细胞核内RNA转移，影响蛋白质合成和酶活力，增加核内DNA合成及有丝分裂，进而促进肝硬化发展；TAA小剂量诱发肝细胞凋亡，大剂量导致脂质氧化和小叶中央坏死，肝纤维化组织改变接近人类肝硬化表现；DGA小剂量长期使用亦可诱发肝纤维、肝硬化和肝癌。DGA不是直接杀死肝细胞的原浆液，而是间接作用的归纳毒剂。DGA进入体内后，可造成肝内尿苷三磷酸(UTP)夺获，糖原、RNA、糖蛋白合成障碍，谷胱甘肽的耗竭，肝巨噬细胞的激活，TNF-a的大量释放，导致肝脏细胞功能性和结构性损伤，并诱发肝组织坏死和肝细胞凋亡。DMNA、DENA、TA模型特点：操作方便，模型稳定，可同时对肝硬化门静脉高压病理过程和肝硬化向肝癌转化机制进行研究，但毒性大、易挥发、成模率不高。 DGA模型特点：有剂量依赖性，病理改变与病毒性肝炎相似，可以同时观察肝硬化门静脉高压病理过程和对肝纤维化可逆性进行研究，模型重复性好，但造模剂量大，周期长，药品价格昂贵，动物易肝衰而病死率较高，限制了该模型的普及与广泛应用。