动物造模,药效评价,肝炎病毒 z-bio 2024-08-02 93

　　目前，乙型肝炎病毒动物模型主要有树鼩乙型肝炎模型、鸭乙型肝炎模型、旱獭乙型肝炎模型和小鼠乙型肝炎模型。

　　【造模机制】乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)主要通过血液和血制品传播，采用HBV患者血清或HBV DNA，经静脉注射或采用水动力高压注射方式注射到动物体内。

　　【造模方法】

　　树鼩：将乙肝病毒表面抗原(HBsAg)及乙肝病毒e抗原(HBeAg)均阳性的乙肝患者血清0.5ml，经股静脉接种树鼩。

　　鸭：将鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus, DHBV)经静脉注射、肌内注射、腹腔注射、肝内注射和鸭胚静脉注射方式注射到鸭体内。

　　旱獭(woodchuck)：旱獭肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHY)是继人类HBV之后发现的另一个嗜肝DNA病毒。旱獭慢性感染WHV可逐步发展为重型肝炎和肝癌，与人类感染HBV发展过程极为相似。将WHV接种幼龄旱獭，可获旱獭肝炎模型。

　　水动力法转染小鼠模型：采用高压水动力法向小鼠尾静脉注射HBV质粒DNA，注射后可在血清中检测到HBV DNA。

　　【模型特点】

　　树鼩：感染HBV后，血液中可检测到HBsAg、抗HBs或HBV DNA；肝组织免疫组织化学检测可见HBsAg和(或)HBcAg；血清ALT升高；Southern blotting可检测到肝组织中有整合形式存在的HBV DNA。树鼩模型成本低、实验操作方便、不受动物伦理严格限制。

　　鸭：1日龄鸭接种DHBV后感染率可接近100％，且能维持较长时间的病毒血症，肝脏中也能检出DHBV DNA。5日龄接种后，DHBV DNA及内源性DNA多聚酶活性下降，14日龄接种后则不产生病毒血症。感染病毒后机体可同时出现相应的病毒特异性体液及细胞免疫应答，产生鸭DHBsA9。且能保持22周。

　　旱獭：感染WHV后，会出现WHsAg抗原血症，电镜下可见特征性的WHV表面和核心颗粒。

　　水动力法转染小鼠模型：感染HBV后，病毒滴度较高，HbsAg可在体内维持6个月以上，HBV复制转录中间产物可在体内持续检测达1年。

　　【模型评估和应用】 1996年，Walter等人报道树鼩新生期接种人HBV，结局类似于人的急性自限性肝炎，成年期接种则表现为一过性感染。幼年和围生期树购接种HBV，可提高感染效率。新生树鼩接种人HBV，病毒可在动物体内长期存在并稳定复制。2012年，在树鼩原代肝细胞中找到了乙肝病毒和丁肝病毒的共受体-钠离子-牛磺胆酸共转运多肽，因而树鼩有望成为人HBV可靠的动物模型。

　　鸭感染DHBV后的病毒血症与鸭龄成相关性， DHBV的感染时机是影响感染率及预后的重要因素。1日龄鸭腹腔注射感染DHBV后，2周后阳性率为89％左右，4周后可达94％左右，并持续22周。而10日龄感染后，2周后阳性率仅16％左右，4周后38％左右，6周后可达61.1％，12周后，约1/2的 DHBV阳性鸭表现为DHBsA9及DHBV DNA转阴。鸭模型DHBV感染率高，易喂养，是一种评估临床前期抗病毒药物治疗效果的良好模型。然而 DHBV属禽类嗜肝病毒与人HBV在结构上有较大差别，而且鸭在进化上与人类差别较大，因此不能很好地再现人HBV感染过程。

　　WHV感染新生旱獭多呈慢性感染，可用于研究HBV的慢性化机制，用于HBV疫苗及抗病毒药物的开发和HBV生活周期、分子机制、感染及癌变机制的相关研究。但是，旱獭肝炎病毒动物模型不能直接感染HBV，WHV与HBV依旧存在一定的差异，不能完全模拟HBV的病理过程。

　　水动力法转染小鼠模型：该模型可用于研究 HBV生活史、慢性感染机制，并可特异性定位突变 HBV-DNA，研究单个或多个基因在HBV感染进程中的作用机制；同时，由于是免疫全能小鼠，可用于研究病毒引起的免疫效应机制。