动物造模,药效评价,自体血栓大脑中动脉闭塞 z-bio 2024-07-25 209

　　1.造模材料  动物：Wistar大鼠，雄雌各半，体重250～350g；药物：6％水合氯醛，凝血酶，枸橼酸钠(0.109mol/L)；器械：生理多导仪，硬脊膜外导管，22G静脉留置针。

　　2.造模方法

　　(1)抽取动脉血：将动物用6％水合氯醛溶液35mg/100g体重腹腔注射麻醉，颈部正中切口，常规方法分离右侧颈总动脉(common carotid artery, CCA)、颈内动脉(internal carotid artery, ICA)，分离并结扎翼腭动脉。游离颈外动脉(external carotid artery, ECA)远端并结扎之，凝闭其分支，用微血管夹夹闭CCA、ICA后在紧靠结扎线的近心端剪开 ECA，插入22G留置针，打开CCA处微血管夹，抽取动脉血0.5ml后在距颈动脉分叉1mm处结扎ECA近心端，远端注入少量肝素盐水，打开血管夹。

　　(2)制备改良血栓：将0.5ml动脉血立即注入含有0.75μl枸橼酸钠(0.109mol/L)的EP管内，混匀后5000r/min离心1min。取贫血小板血浆160μl、RBC10μl与1单位凝血酶(25万单位/L)、30μl氯化钙(0.5mol/L)溶液混合，立即将其吸入内径0.58或0.65mm的塑料管内，2min后将血栓移至磷酸缓冲液中，可得到直径0.35mm或0.45mm的浅红色血栓。在手术显微镜下将其剪为长约2mm的小节，依次吸入6个血栓于PE50管内，血栓之间间隔2～3cm，备用。

　　(3)注入血栓：在血栓制好后模型组再次将动物麻醉，暴露颈部动脉，血管夹夹闭 CCA、ICA后解开或剪开ECA近心端的丝线，由ECA切口处再次插入并固定留置针，除去针芯后打开ICA处血管夹，可看到ICA返流出的血液，待留置针内的气体完全被排出后，接PE50管，其另一端与吸有0.25ml磷酸缓冲液的注射器相连，依次注入血栓(约30s)，结扎ECA，打开CCA处血管夹，缝合切口。假手术组操作过程同模型组，但只注入缓冲液0.2ml。

　　3.造模原理  利用大鼠自体血栓建立大脑中动脉闭塞模型。

　　4.造模后的变化  MRI结果：造模动物在MCAO后15min均显示DWI的异常信号，由尾、壳核外侧部、顶叶皮质逐渐扩展，并在H-MRS上看到相应部位出现乳酸信号，乳酸峰逐渐加深。

　　神经功能缺损评分：模型组得分明显小于假手术组。

　　模型组动物可在MCA和ICA内找到血栓。MCAO后30min可看到血栓位于MCA入口处和ICA内，MCA被完全栓塞。

　　病理观察：血栓含量在90％以上。MCAO后6hHE染色可观察到右侧大脑半球大量神经元坏死，纹状体外侧部最明显。