动物造模,颈动脉粥样硬化 z-bio 2023-11-10 690

　　1.造模材料  动物：雄性中国大耳白兔，体重2.25～2.75kg；药物：含1.0％胆固醇和6％猪油的颗粒饲料，麻醉剂，抗生素；器械：球囊导管(2.5mm球囊)。

　　2.造模方法  模型组喂服含1.0％胆固醇和6％猪油的颗粒饲料，1周后实施颈动脉球囊损伤术，术后继续高脂饲料喂养；对照组给予普通饲料。所有动物均单笼喂饲，饮水不限，自由摄食，每天每只进食120g饲料，均喂养8周。

　　实验动物术前12h禁食，不禁水。以3％戊巴比妥30mg/kg静脉麻醉，从耳缘静脉给予肝素200U/kg，沿颈部正中切开皮肤5.0cm左右，暴露并游离右侧颈总动脉3.0～4.0cm，于甲状软骨上方水平分离右侧颈内、外动脉，分别用动脉夹临时夹闭颈总动脉近心端及颈内动脉。颈外动脉远心端结扎，近心端用线提起，距颈内、外动脉分叉点0.5cm约45°角V形剪开颈外动脉，逆行插入球囊约5.0cm。连接手推式压力泵，注入肝素生理盐水，膨至202.7kPa气压，自近心端缓慢回拉，反复3次后撤出导管。结扎右颈外动脉近心端，使右颈总、颈内动脉恢复血流，缝合皮肤，术后连续3天每日肌内注射青霉素80万U。

　　3.造模原理  高脂饲料加球囊损伤颈动脉内皮建立兔颈动脉粥样硬化模型。

　　4.造模后变化  可见模型组高脂喂饲8周后，总胆固醇(TC)(27.7±5.6)mmol/L、低密度脂蛋白-C(low-density lipoprotein, LDL-C)(15.4±3.2)mmol/L、甘油三酯(TG)(2.58±0.81)mmoL/L均较实验前[TC(1.59±0.71)mmol/L，LDL-C(0.75±0.26) mmol/L，TG(0.83±0.20)mmol/L]及对照组[TC(1.6±0.7)mmoL/L，LDL-C(0.77±0.25)mmol/L，TG(0.84±0.21)mmol/L]明显升高。对照组实验前、后差异无统计学意义。

　　病理形态学观察：①肉眼观察各组右颈总动脉血流及病变情况：对照组的颈总动脉活体状态下柔软而有弹性，颜色粉红均匀，取材后见管腔内膜比较光滑。模型组出现典型的动脉粥样硬化特征：活体下外观颜色发白或黄白相间，粗细不均匀，可扪及动脉搏动，管壁明显僵硬。取材后见管壁增厚，内膜可见白色条纹或大小不等黄白色斑块隆起；②光镜下HE染色观察：正常对照组颈动脉内皮细胞完整，单层紧贴内弹力板，中层平滑肌细胞(smooth muscle cell, SMC)排列整齐，呈长形或椭圆形，细胞质呈嗜酸性红染，无明显脂质沉积。模型组颈动脉内皮细胞均完全脱落，多数血管可见粥样斑块或纤维斑块。粥样斑块表面有纤维组织覆盖，形成典型的“纤维帽”，都有一定量的纤维组织，内膜下脂质泡沫细胞、SMC增生明显，中层SMC排列紊乱，细胞质嗜酸性的SMC减少。代之以大量细胞质淡染和充满脂质空泡的泡沫细胞，并经内弹力膜向斑块部位游走。弹力纤维崩解、断裂、溶解，胶原增生，大球囊组部分斑块中有新生血管，并有大量的炎症细胞浸润。

　　5.注意事项  手术器械严格消毒，防止手术感染，手术创伤应尽可能小，严格无菌操作。