动物造模 中国实验动物信息网 2023-03-24 1972

　　目的 利用成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9) ]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型，并对其表型进行初步分析。

　　方法 根据抑制素α亚基的*外显子碱基序列，设计单链向导RNA (single guide RNA sgRNA）识别序列，构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA 聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后，将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入C57BL/6J小鼠的受精卵，通过PCR和基因测序法检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变情况。选取F2代基因敲除纯合子的雄鼠和雌鼠，分别取雄鼠睾丸和雌鼠卵巢进行观察，并进行石蜡切片和HE染色分析。

　　结果 共获得了12只FO代抑制素基因敲除小鼠，选取8号雄鼠与C57BL/6J雌鼠回交，得到F1代小鼠，再相互交配得到F2代小鼠。F2代小鼠各基因型比例符合孟德尔定律，基因敲除小鼠不存在胚胎致死现象。F2代纯合子小鼠睾丸和卵巢发生癌变且无法生育。

　　结论 成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型，F2代纯合子小鼠的癌变表型显示抑制素在小鼠生殖系统中发挥重要功能。