动物造模 中国实验动物信息网 2023-12-18 1901

　　目的： 构建慢病毒介导的NogginRNAi干扰序列,并分析这些干扰序列对Noggin基因的沉默效果.

　　方法： 针对目的基因Noggin的mRNA设计四条干扰序列,并将这些序列连接到Lenti-KD慢病毒载体,将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞,获得重组慢病毒.将重组病毒感染MC3T3-E1细胞,利用puromycin进行筛选,获得稳定表达细胞系.通过实时荧光定量PCR和Western blot技术分析不同干扰序列的干扰效果.

　　结果： 实时荧光定量PCR结果显示,四种干扰序列对Noggin基因的表达都有一定的沉默效果,但只有shNoggin-1(P<0.01)对其表达影响显著.Western blot结果显示,四种干扰序列中只有shNoggin-1(P<0.01)对Noggin的表达蛋白具有显著的降低作用.

　　结论： 获得了一种Noggin基因的干扰序列,该序列能够干扰Noggin基因mRNA的稳定性,从而影响蛋白的表达.该干扰序列可以用于部分敲除Noggin基因,从而用于研究Noggin基因的功能.