动物模型,血小板 中国实验动物信息网 2020-08-10 999

　　大多数患有特发性血小板减少性紫癜（特发性血小板减少性紫癜，ITP）的患者没有明确的外源性病原体，并在血液中通过抗血小板抗体检测到，并且还与特发性自身免疫性血小板相关。紫癜减少，以区别于继发性自身免疫性血小板减少症。血小板减少性紫癜是一种常见的临床免疫疾病，主要由于与血小板结合的自身抗体引起血小板破坏的增加。 ITP的主要症状是皮肤和粘膜出血，血小板计数和寿命减少以及骨髓中巨核细胞数量正常或升高，通常伴有发育和成熟障碍。抗血小板抗体通常在患者血清或血小板的表面上发现。根据病因，易感性，临床症状，治疗效果和病程，ITP可分为急性和慢性两种形式。尽管急性ITP的发生与各种病毒感染密切相关，但慢性ITP经常发生在育龄妇女中，并且在怀孕期间容易复发。鉴于其自身免疫相关病因，该疾病的研究应基于与该疾病性质相似的动物模型。

　　小鼠血小板减少性紫癜模型

　　（1）复制方法BALB/c小鼠出生后8周体重约20 g。抗原制备：用乙醚麻醉BALB/c小鼠，移开眼睛，收集血液（EDTA-Na2抗凝治疗），分离血小板，洗涤并用生理盐水稀释。免疫：取准备好的血小板，将弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混合成油包水抗原。含有完全弗氏佐剂的抗原在第0周皮下注射到豚鼠的脚，背部和腹部，每次至少注射4次，并在第5周从豚鼠心脏采血（不进行抗凝治疗）。以560/min的速度离心10分钟，收集上清液，获得豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS），并在-20°C下保存。抗血清处理：从冰箱中取出APS，将其在56°C下浸泡30分钟，吸收相同量的BALB/c小鼠红细胞至少两次，然后用生理盐水稀释以制备各种浓度的APS。我会。使用ELISA或琼脂扩散检测抗血清滴度。将抗血清（100μl）注入BALB/c小鼠的腹腔会导致小鼠短暂性血小板减少。注射抗血清后的第1、3、5、7、9、11、11和13天，分别将100μl制备的豚鼠抗小鼠血小板血清注射到小鼠腹腔中，以长期持续进行血小板减少。在预定时间将小鼠麻醉并处死，并用固定剂固定脾脏，胸腺，肾上腺和股骨标本，制备正常组织切片并在显微镜下观察。

　　（2）模型表征模型小鼠在注射抗血清后会出现诸如竖发，大便稀疏，体重减轻，躁动不安以及食物和水消耗减少的症状。建模后24小时，模型小鼠开始死亡。死小鼠在腹腔，肠和尿道中流血，并在腹膜后部显示大量出血点。建模后一到三天是小鼠的*大死亡时间。在注射抗血清后7天内，动物死亡率和各种出血症状很常见。将抗血小板血清注入模型小鼠后，它会导致血小板计数显着下降。血小板相关抗体（PAIgG）正在上升。注射后6小时，小鼠脾脏重量开始增加，第5天脾脏重量是正常小鼠的3.6倍。注射抗血清后第6天，脾巨核细胞开始显着增加，在第15天趋于维持在高水平，然后趋于正常，脾脏重量的增加与巨核细胞的增加显着一致。我在做显微组织病理学观察显示，建模后6小时在骨髓组织中发现了巨核细胞，在第3天达到峰值，但在第22天仍高于正常小鼠。四分之一的模型小鼠显示胸腺和肾上腺皮质萎缩。建立模型后，小鼠出现清晰的皮下紫癜，集中在注射部位（腹部），阴囊，四肢和尾巴。通过这种方法（免疫方法）建立的小鼠（或兔）血小板减少性紫癜模型具有简单的制造原理，更复杂的操作方法，小的干扰因素以及相对较低的成本。但是，抗体是外源性的，需要不断补充和输注，而慢性ITP的稳定性相对较差。该效果优于通过ADP，马里兰，环磷酰胺或辐射复制的血小板减少症的先前动物模型。尽管使用ADP，马里兰，环磷酰胺和其他方法建立的模型也会引起血小板减少，但这些复制方法会损害模型动物的骨髓造血干细胞，从而导致骨髓和外周血血液中的三态细胞减少并复制了血小板减少症，该模型的病因和临床表现与ITP并不完全相同。对新药治疗ITP的疗效或药理学的研究可能会直接影响疗效的判断。应用这种方法复制ITP动物模型的关键在于血小板抗原的纯化，而免疫途径和方法可以直接影响APS的效价。

　　（3）比较医学原发性血小板减少性紫癜是一种常见的临床出血性疾病，其特征在于外周血血小板减少，骨髓巨核细胞增殖和成熟受损。由于可以在临床患者的血液中检测到抗血小板抗体，因此也称为免疫性血小板减少性紫癜。病因是由于相同的抗体或自身抗体结合血小板膜抗原，导致血小板破坏和疾病增加。因此，血小板抗体的检测在诊断ITP疾病和确定疗效中非常重要。该疾病的临床治疗主要是使用皮质类固醇，免疫抑制剂和脾切除术。从长期疗效的角度来看，大多数患者仍然是完全直接的。因此，迫切需要基础和临床研究上的突破，并且当前的临床研究主要集中在PAIgG上。通过注射外源抗体建立的慢性ITP动物模型表现出与临床人ITP患者相似的特征。将抗血小板血清注入模型动物后，血小板计数显着降低，PAIgG水平升高。注入的抗血清越多，PAIgG的增加就越大，而血小板减少症则越严重。同时，模型动物的血小板寿命缩短，伴有发烧，紫癜和止血。该模型对研究人ITP的病因和筛选抗血小板减少药具有重要的应用价值。