动物模型,白细胞疾病 中国实验动物信息网 2020-08-10 837

　　1白细胞减少症的动物模型

　　用于研究化学治疗药物毒性的衰减研究通常需要建立化学疗法诱发的白细胞减少症和骨髓减少症的动物模型。白细胞减少症（leukopenia）是一种常见的临床血液病。当人体外周血中的白细胞数量降至4 x 1000,000,000/L以下时，称为白细胞减少症。当体内白细胞数量显着下降至2 x 1000000000/L以下时，中性粒细胞的绝对值变得小于0.5 x 1000000000/L也消失，这被称为粒细胞缺乏症（agranulocytosis）。在临床上，白细胞减少症患者的临床表现主要是疲劳和头晕，通常伴有厌食症，四肢无力，失眠和失眠，低烧，心慌和冷背痛等症状。粒细胞缺乏症主要是由突然发作和恐惧引起的感冒，高烧和喉咙痛引起的。粒细胞缺乏症是白细胞减少症发展到严重阶段的病状，两者的病因和病因基本相同。临床上，白细胞减少症可分为两种：原因不明和继发性。其中，前者较为普遍，但后者主要是化学因素，物理因素，药物因素和某些疾病；或化疗后出现的各种实体瘤，各种血液病，严重的传染病和病因尚不清楚。

　　1.1大鼠白细胞减少症模型

　　（1）复制方法通过腹腔连续30天向体重约150g的SD大鼠注射环磷酰胺，剂量为30mg/kg体重。停药前后，分别于停药后第3、5、2、5、8、11和15天从模型大鼠采血，观察外周血白细胞计数。 ..*终观察后，将动物通过麻醉杀死，取出股骨，用汉克斯氏溶液洗涤骨髓细胞，并在显微镜下观察骨髓有核细胞的数量。

　　（2）模型的特征注射环磷酰胺后，模型大鼠的食物摄入和水消耗减少，活动减少，毛被变松和变暗，体重增加减慢，身体停药15天后，身体显瘦，身体开始明显恢复。 ..给药三天后，模型大鼠外周血白细胞总数显着减少，模型大鼠外周血白细胞总数在给药后第五天降至*小值;通过给药确定白细胞总数。我停了两天后，价格没有明显上升。在第11天和第15天，白细胞计数趋于增加，模型大鼠中的白细胞水平长期维持较低，并且在停药后第15天未见明显恢复。做到了。显微镜观察表明，模型大鼠的骨髓有核细胞数量明显低于正常动物。

　　（3）比较医学。通过对动物体内白细胞计数，体重变化和骨髓有核细胞的多点动态分析，模型大鼠表现出白细胞减少，骨髓有核细胞减少和体重减轻。与癌症患者化疗的临床毒性一致，该模型可用于预防和治疗临床化疗毒性，药物筛选或其他预防和治疗方法。该领域的早期研究使用小鼠来建立模型，但是实验性外围观察通常不足，因为小鼠外周血白细胞会在6天后超过基础水平，实验结果无法评估。在以这种方式建立的模型中，模型大鼠的白细胞在停药后恢复缓慢，并且在停药后第15天维持低白细胞水平，从而可以进行实验研究中的观察时间..

　　1.2急性白血病的动物模型

　　临床上，急性白血病（急性骨髓性白血病，AML）是体内一个或多个造血干细胞和祖细胞的恶性转化及其正常增殖。 ，指的是分化和成熟能力的丧失，持续增生，逐渐取代骨髓，并通过血液渗透到人体组织和器官。

　　1.小鼠肉芽肿性白血病模型

　　（1）复制方法BALB/c雄性小鼠重约20g，8周大。以1000/min的速度离心急性骨髓单核细胞白血病细胞的培养物10分钟，除去上清液，用盐水洗涤3次，并将浓度调整为2x1000000000 /L。将制备的细胞悬液以0.5ml /小鼠的剂量注入小鼠的尾静脉。接种后，每天观察模型小鼠的存活天数，并收集血液以检测外周血白细胞计数，未成熟的骨髓单核细胞的比例，成髓细胞单核细胞的比例以及通过透射电镜观察的骨髓白血病细胞。观察到形态。

　　（2）模型特征：采用尾静脉接种法，模型小鼠存活时间可达（38.40±2.21）天。在接种的第14天，外周血白细胞计数和未成熟的骨髓单个核细胞的百分比是明显的。分别增加（19.24±1.73）x 1000000000/L和（6.24±0.85）％，有逐渐增加的趋势;成纤维细胞单核细胞的百分比也显着增加，达到（41.3±4.90）％。该模型的建立方法简单易学，模型成功率高，可重复性好。在实验过程中，模型小鼠的免疫力较弱，因此有必要加强动物实验的控制和喂养控制条件。 （3）比较医学临床急性髓细胞性白血病的特征是两个未成熟的细胞，即早幼粒细胞谱系和单核细胞谱系，它们来自骨髓或外周血中的祖先骨髓细胞。该模型的病理学特征与临床人类急性髓单核细胞白血病相似，并且适合于对相似疾病的病因和药物治疗进行临床研究。

　　1.3慢性白血病的动物模型（Animalmodelofchronicmyelogenousleukemia）

　　临床慢性白血病（CML）分为慢性骨髓性白血病和慢性淋巴细胞性白血病。慢性粒细胞性白血病，称为慢性粒细胞性白血病（CML），在临床上发病率相对较低，在白血病中也相对较慢。它是源自骨髓多能造血干细胞的恶性增生性疾病，其表现为骨髓祖细胞池的扩大以及骨髓细胞系及其祖细胞的过度生长。 CML在临床上主要表现为疲劳，体重减轻，发烧，脾肿大和白细胞异常增加。慢性淋巴细胞性白血病称为慢性淋巴细胞性白血病（慢性淋巴细胞性白血病，CLL），是一种疾病，其中体内淋巴细胞增殖并在体内异常蓄积，免疫功能受损。患有慢性淋巴细胞的患者具有很长的寿命，并且常常与免疫反应缺陷有关，因此也被称为免疫缺陷性淋巴细胞疾病。主要的临床表现主要是淋巴结肿大，通常伴有肝脾肿大，贫血，出血，在某些情况下还损害皮肤。

　　1.免疫缺陷的小鼠-人类慢性粒细胞白血病模型

　　（1）复制方法NOD/SCID小鼠，SCID小鼠和NOD/Lt株（TL，BL，NK细胞缺乏，循环补体缺乏）抗原呈递细胞的分化和功能障碍）将获得的NOD/Ltsz-scid/scid小鼠（缩写为NOD-SCID小鼠）回交。首先，用400cGy60Coγ射线照射小鼠，从从未接受过化疗的慢性CML患者的新鲜骨髓和外周血中分离出白血病细胞，并从尾静脉杀死了（8至14）×10,000,000个白血病细胞。我把音量输了。辐照的小鼠腹膜内注射交替的PIXY321（7μg）和c-kit配体（10μg）。在CML细胞移植后30至90天内处死小鼠，并使用人bcr特异性DNA探针进行Southern印迹分析和流式细胞仪。

　　（2）模型特征移植后，NOD/SCID小鼠中约70％的人类CML细胞是Ph细胞。无论是移植CML患者的骨髓细胞还是外周血细胞，ph +细胞的检测水平都非常相似。使用此方法复制CML模型时，NOD/SCID小鼠的性能优于SCID小鼠。由于NOD/SCID小鼠缺乏功能性NK细胞，因此可以在少数患者中成功建立CML慢性期细胞模型。当将人造造血干细胞或胎儿肝细胞移植到NOD/SCID小鼠中时，人骨髓白细胞的数量显着增加，并且人造造血干细胞分化为髓系，但红色系和淋巴系细胞将大大减少。移植更有可能获得成功，尤其是在加速和原始阶段的细胞中，例如使用患者CML细胞。以前在比较医学中的研究

　　（3）表明，源于CML患者原始阶段的肿瘤细胞可以在SCD小鼠中生长。白血病细胞在移植到非造血组织之前主要分布在骨髓和外周血中。分布非常相似。但是，已建立的免疫缺陷的小鼠-人类慢性粒细胞白血病模型仍具有一定的局限性，因为小鼠的造血生长因子，黏附分子和细胞外基质与人类并不完全相同。但是，可以将NOD/SCD小鼠用于制备更理想的人类CML动物模型。

　　2.用P210逆转录病毒载体转染小鼠骨髓细胞并移植正常小鼠

　　（1）复制方法是氟尿嘧啶（5-Fu）（150 mg/kg bw）预处理的雄性用P210基因逆转录病毒载体转染分离出BALB/c小鼠的小鼠骨髓细胞，并将（1？2）×100000细胞注射到接受致死剂量照射的同种异体雌性小鼠中。潜伏期超过20周的小鼠表现出粒细胞异常增殖和造血功能受损。从这些小鼠中分离出的细胞可以有效地移植到辐射的同源小鼠中。这表明用bcr/abl基因转染了小鼠，骨髓细胞具有较高的再生能力，可用于模拟人CML。 MSC逆转录病毒载体可以提高表达ber/abl融合基因的病毒效价，CML的潜伏期短。孵育4-6周后，所有接受转染细胞的小鼠均可发生CML。主要变化包括外周血白细胞的大量增加，脾脏肥大和bcr/abl融合蛋白的过表达。

　　（2）模型的特征，无论abl基因的形态如何，90％的小鼠都会发生肿瘤。这些小鼠中约有50％表现出异常的骨髓增殖，这与人类慢性粒细胞性白血病的慢性期有许多相似之处，而其余的小鼠则表现出B淋巴细胞异常增殖。 .. （3）比较医学用这种方法建立的CML动物模型在临床上仍与人CML有所不同。例如，大多数CML模型小鼠通常会迅速死亡，并且不会经历与人类CML相同的慢性期。在人的CML中，动物肺部出血很明显，而且很少见。

　　3.bcr/abl转基因小鼠模型

　　（1）复制方法小鼠Tec基因的启动子序列（-1948？+22）被用作创建转基因载体的调控序列。 Tec基因的启动子序列调节P210蛋白的表达以产生转基因小鼠，而bcr/abl融合蛋白的表达对小鼠胚胎具有致命性。

　　（2）模型的特征目前，不能保证所有转基因小鼠及其后代都表现出CML症状，有些人可能表现出急性白血病的症状。

　　（3）比较医学大多数转基因小鼠首先会出现异常的粒细胞增殖和高血小板增多症，然后在一段时间后出现骨髓增生综合征（MPD）。这与人类CML非常相似。一些转基因小鼠在分娩后表现出急性白血病，但其后代在潜伏期后表现出骨髓增生异常综合症。这表明选择合适的启动子用于构建CML转基因小鼠非常重要。