动物模型,溶血性贫血 中国实验动物信息网 2020-08-10 1058

　　溶血性贫血是当红细胞破坏增加且速度超过造血功能的代偿能力时发生的一组贫血，当红细胞的平均寿命为15至20天，并且红细胞的破坏率远远超过骨髓的代偿能力时，就会发生贫血。溶血性贫血的根本问题是红细胞寿命较短，更容易被破坏。主要通过三种机制：红细胞膜异常改变；血红蛋白异常；机械因素。

　　1由苯乙吩嗪引起的溶血性贫血的大鼠模型

　　（1）复制方法每天饲养180-250 g的雄性大鼠，可以自由饮水和进食。在建模的第1、4和7天腹腔注射2％的乙酰苯肼（APH）盐水。初始注射量为1 ml/100 g体重，第二和第三次剂量减半至0.5 ml/100 g体重。注射苯乙吩嗪后，每天早晨从大鼠的尾静脉收集血液以进行血红蛋白测量，并测量红细胞和白细胞的数量。网织红细胞，hemabody，嗜中性粒细胞，碱性磷酸酶（AKP），酸性磷酸酶（ACP），ATP酶，琥珀酸脱氢酶（SKH）和葡萄糖的制备方法不同。 -6-磷酸酶（G-6-P）染色。

　　（2）模型特征APH注射后三天，模型大鼠开始出现疲劳，疲倦，嗜睡，喘息，面部发蓝，眼睛，耳朵，尾巴和低体温。肉眼观察，肝和脾都肿大，脾肿大特别明显，暗红色。血液学观察：血红蛋白和红细胞逐渐减少，网织细胞，Hey身体和白细胞的总数显着增加（表明贫血的血象）。 APH注射一周后，模型动物的血红蛋白减少到40-70g/L，红细胞减少到（200-400）x 1000000000/L，白细胞减少到（30-39）x 1000000000/L ，网织红细胞增加至85、 ％-95％，海德身体增加到30％-38％（通常为0）。血细胞的组织化学染色显示中性粒细胞AKP，ACP，ATPase，SDH和G-6-P酶在不同程度上异常。

　　（3）比较药物乙酰苯肼可引起骨髓造血干细胞生长的变化，促进它们从骨髓向脾脏的迁移，并在代偿期增加骨髓血细胞。中毒会加速红血球，导致骨髓造血功能的补偿不足，导致贫血，白血球和网状红细胞迅速增加。使用APH引起溶血性贫血是更经典的方法。*近，已经出现了使用基因靶向，遗传修饰和其他技术来创建该模型的方法，该方法在中国尚未广泛使用，并且该过程相对繁琐且耗时。可用于创建模型的实验动物包括小鼠，大鼠和兔子。溶血性贫血是由红细胞迅速破坏和缺乏骨髓生成引起的贫血。该模型的临床症状，血液图像和血细胞生化指标在临床上基本上与人类溶血性贫血相似，并且乙酰苯那嗪诱导的溶血性贫血的动物模型基于人类溶血性贫血。研究贫血的理想模型。

　　2盐酸苯肼诱发的溶血性贫血的大鼠模型

　　（1）复制方法对于重约180 g的SD雄性大鼠，将盐酸苯肼制成5％的溶液，并注入无菌注射用水； 40 mg /连续5天腹膜内注射100mg/kg体重的盐酸苯肼。注射盐酸苯肼后五天，定期麻醉大鼠，从股静脉取血，以测定血浆中无血红蛋白，触珠蛋白，变性的球蛋白体，外周血红细胞，血红蛋白，白细胞，网织红细胞和血小板。然后，收集大鼠股骨骨髓涂片，观察骨髓增生，计算红色颗粒的比例，称重肝脏和脾脏，并收集动物的骨髓，肝脏和脾脏组织。然后，用10％甲醛溶液固定并进行规则的组织切片。 HE染色，在光学显微镜下观察。

　　（2）模型的特征注射后5天，模型大鼠反应缓慢，活动减少，尾巴，嘴唇和四肢皮肤稀薄，尿液呈深黄色；红细胞计数和血红蛋白浓度显着并且网织红细胞明显增加。变性的球蛋白体和游离Hb也增加，肝脏和脾脏体积增加，体重增加。这与正常对照大鼠明显不同。对模型动物的显微组织病理学观察显示少量血液渗入骨髓血管，活跃的巨核细胞谱系和红细胞增生，肝细胞显示轻度至中度颗粒变性，以及肝实质。充血，脾脏的红髓肿大并扩散有厚厚的红细胞。脾窦充满红细胞，白色牙髓被压迫，可见旧出血。在大鼠腹腔内注射盐酸苯肼5天后，动物可能会出现明显的贫血迹象，血液和骨髓图像显示出溶血性贫血的变化，某些组织和器官的疾病。可能造成人身伤害。该模型易于建立，结果可靠，动物死亡率低，实用性好。

　　（3）比较医学溶血性贫血是一种常见的临床造血疾病，没有更好的治愈方法。建立理想的溶血性贫血动物模型对于研究人类溶血性贫血的病因和机制以及观察药物疗效具有重要意义。该模型使用盐酸苯肼引起大鼠溶血性贫血。其主要机理是苯肼通过腹膜内注射吸收到血液中后，会与氧合血红蛋白迅速反应，生成高铁血红蛋白（MHb），氮和苯。 MHb是Hb分子变性的重要步骤，与氧化Hb的血红素相比，体内MHb的血脂更容易丢失，这使无血红素的球蛋白更容易沉淀。在正常情况下，红细胞始终与氧化剂（例如过氧化物阴离子（O2-），过氧化氢（H2O2）和脂质过氧化物）接触，但保持完整性。红细胞具有三种酶，过氧化氢酶，还原型谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPX）和超氧化物歧化酶（SOD），可保护它们免受氧化损伤。但是，当体内O2和H2O2的产生超过SOD和过氧化氢酶保护红细胞免受氧化损伤的能力时，Hb巯基，酶蛋白和膜蛋白被氧化，Hb氧化导致MHb和Heinz氧化。形成了。 （亨氏）身体。亨氏体沉积在红细胞膜上，降低其流动性，增加其渗透性并引起氧化性溶血。同时，苯肼可能裂解一些关键的膜功能区。当在体外或大鼠中注射时，它抑制红细胞膜中的钙依赖性ATP酶，并迅速增加红细胞中的钙浓度。因此，推测红细胞的钙环境受损是氧化剂诱导的溶血的重要成分。红细胞膜的脂质过氧化也可能促进溶血产生。这是因为红细胞中多不饱和脂肪酸和二烯链的损失直接使膜变薄。膜的流动性和膜氨基亚氨基丙烯交叉链的形成破坏了红细胞膜的正常功能。