动物造模 中国实验动物信息网 2021-07-06 890

　　目的：建立鼠冠状病毒血清抗体ELISA检测方法，用于该地区MHV的日常监测，以便及时确定SPF小鼠的感染状况。

　　方法：选择MHV1、MHV-JHM、MHV-A59 3株MHV，通过L929细胞增殖培养纯化和浓缩抗原，选择合适类型的包被抗原。免疫 BALB/C 小鼠以获得高滴度的免疫阳性血清。优化ELISA反应体系，建立标准化ELISA试剂盒，用于临床小鼠血清样本的检测。

　　因此，选择了适合该地区的MHV包被抗原类型为MHV1、并建立了病毒扩增和浓缩纯化方法。制备的MHV抗血清在同一批次中达到多个高滴度水平，可作为标准化的质控血清。包被抗原、待测血清和酶偶联物的*佳工作浓度为 4.0 μg/mL (10-7.73/0.1 mLTCID50)，1:40 和 1:4000 稀释，批内和批间平均变异系数为. 5.13?5.57?检测灵敏度1：4000稀释，兼容鼠仙台病毒（SV），鼠肺炎病毒（PVM），reovir III型（Reo3），鼠细小病毒（MVM），鼠痘有。病毒（Ect）阳性血清没有交叉反应。稳定性试验的相对偏差小于10?检测血清样本165份，阳性血清符合率为97.37?37/38），阴性血清符合率为92.19?118/127）。

　　结论：本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清中MHV抗体具有较高的特异性、灵敏度和重现性，用于该领域MHV的日常病原学监测，可以准确判断小鼠的感染状态。