动物模型,溃疡性结肠炎 中国实验动物信息网 2020-08-07 953

　　（1）复制方法在成年雄性BALB/c小鼠中，将腹毛（不损伤皮肤）切成约2.0 cm x 1.5 cm和3.3％的2,4-二硝基氯苯（DNCB）丙酮橄榄油。溶液（1：1比率）腹部涂片，每天1次，每天50μl，连续4天。从第5天起，将插管的尖端放置在距肛门3至3.5厘米处，将直径为1毫米的硅胶管插入小鼠的大肠，并注射0.2至0.4％的DNCB乙醇水溶液（比例3：2）。每天2μl/ g，连续4天。建模过程包括每天观察小鼠的体重和粪便特性，并使用疾病活动指数（DAI）对动物状况进行评分。 ①体重：正常为0分，即1％-5％，比平常低6％。 -10％，11％-15％， 15％，1分，2分，3分，4分。 ②大便粘度：正常0，松散2、腹泻4、 ③大便出血：正常0分，显性2分。灌肠后第9天断头取血，分离血清，检测血清中的NO和TNF-α水平，打开腹腔，分离大肠，肠壁成为肠系膜。沿纵切，观察到宏观形态变化。从严重病变中取出组织标本，固定在10％甲醛溶液中，包埋在常规石蜡中，HE染色并在显微镜下检查结肠的病理变化。总体形态评分标准：无结肠粘连（结肠很容易与其他组织分离），无溃疡，无炎症0分，轻度结肠粘连，1个局部充血，1个严重结肠粘连和1个溃疡（1厘米） ）刺激性得到4分。微观病理评分标准：正常结肠粘膜0级，隐窝缺损1/3级1、隐窝缺损2/3级2和上皮单层伴轻度炎性细胞浸润覆盖的本征层为3级。粘膜侵蚀和溃疡伴有炎性细胞浸润，等级为4级。或者，成年雄性大鼠在用10％Na2S溶液将颈背脱毛后，连续14天每天使用一次2％DNCB丙酮滴剂，每天5次/小时。然后，使用尼龙导管，以0.25 ml /剂量的剂量每天一次将0.1％DNCB乙醇溶液注射到肛门8 cm结肠腔中，连续4天。建模后，每天观察模型动物的胃肠道疾病的整体外观和表现。我每周都要牺牲几只动物。用肉眼观察结肠粘膜和浆膜表面的外观，并通过用10％甲醛溶液切割来固定病变。常规石蜡包埋切片，HE染色，溃疡形状，深度，肠壁炎性细胞类型和浸润程度，以及光学显微镜观察淋巴滤泡和纤维化组织增生的变化。或切断成年雄性豚鼠，在脖子后方约1 cm2的头发，并用2％DNCB乙醇溶液将其悬挂在表面一次，每小时5滴，持续10至14天。随后，收集直径为3mm的硅管，将其插入距肛门12cm深的肠中，注射0.5ml的20％DNCB丙酮溶液，并在2天后处死小鼠。材料，观察和评估方法与上述相同。

　　（2）模型特征灌肠后24小时，模型小鼠开始出现腹泻，三天后体重明显减轻。在第5天，0.2％DNCB灌肠有肠粘连和肠胃气胀。在显微镜下，我们发现腺体是随机排列的，杯状细胞被耗尽了。固有层中弥漫性炎性细胞浸润，隐窝脓肿和溃疡清晰可见，0.4％DNCB患者具有广泛的结肠粘连，近端肠管扩张，少量白色渗出液，结肠粘膜充血，坏死，多发性溃疡，下隐窝隐窝可见明显缺损，组织学紊乱，粘膜糜烂，出血，坏死和广泛的深溃疡。模型大鼠具有四个连续的灌肠，缺乏能量，疲劳，卷曲，毛皮松弛，活动减少，食物摄入减少，粪便或粘液和粪便血液松弛。*后一次灌肠后的12天内，模型大鼠的结肠粘膜显示不同程度的充血和水肿，表面覆盖有粘液，血液，坏死组织，有明显的溃疡，溃疡周围的粘膜粘膜下层充血和水肿，或浸润中等量的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，少量至中等量的大单核细胞和淋巴细胞；溃疡底部多为血管生成肉芽组织，一些具有不同程度的纤维化组织增生。肌肉层也浸有少量至中度的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，有时还浸入大的单核细胞和淋巴细胞。在完成模型后的十二至五十天，模型动物的结肠仍显示出充血和水肿，但是程度随时间逐渐降低。在显微镜下，结肠粘膜和粘膜下层稍有充血，淋巴细胞和嗜酸性粒细胞主要浸润炎症细胞，偶尔嗜中性粒细胞和大单核细胞浸润，以及肌肉层中的淋巴细胞。偶有嗜酸性粒细胞浸润，某些模型动物肠壁纤维组织增生，局部粘膜萎缩，隐窝形状不规则和肠上皮再生。模型豚鼠的组织病理学变化与模型大鼠基本相同。主要症状是肠壁充血，水肿，增厚，大量嗜中性粒细胞和其他炎性细胞浸润到粘膜下层，隐窝脓肿和溃疡的形成，严重时坏死。

　　（3）比较医学2,4二硝基氯苯（DNCB）是一种小分子，可以与半抗原结合在一起作为组织蛋白形成完整的抗原，并刺激人体产生T细胞介导的免疫力。它是一种化学物质。反应。在该实验中，将DNCB摩擦到动物的表皮上，并通过使淋巴细胞与皮肤蛋白结合而致敏。当致敏淋巴细胞再次在肠道中与DNCB接触时，就会出现过敏反应延迟，引起类似的人溃疡性结肠炎，例如腹泻，血便，结肠粘膜发炎，甚至表现为溃疡的病理变化。 ..模型动物结肠黏膜的组织病理学特征与模型完成后的时间明显相关。在完成模型的12天之内，结肠黏膜溃疡，周围组织和肌肉层的溃疡阶段有明显的炎性细胞浸润。在12至50天之间，结肠粘膜炎性细胞浸润减少，在部分肠壁中有明显的纤维组织。增生是溃疡的恢复期。由于对DNCB的响应因物种而异，因此在建模过程中DNCB的浓度，剂量和作用的持续时间差异很大，必须由实验人员反复进行探索。该模型更适合于研究与溃疡性结肠炎的发病机理和反应有关的炎性细胞的类型和方法。尽管该模型持续时间长并且没有病灶复发的特征，但是它是溃疡性结肠炎中*广泛使用的动物模型之一、作为延迟性胃肠道过敏反应的典型动物模型。