动物模型,溃疡性结肠炎 中国实验动物信息网 2020-08-07 2509

　　（1）繁殖方法BALB/c小鼠，7-8周大，体重25-30g，剃毛的腹部皮肤（2cm x 2cm），0.2ml的3％恶唑酮（溶于100％乙醇）皮肤，隔天一次重复5天，将直径2毫米的硅胶管穿过肛门插入约4厘米深的肠中，然后注入0.15毫升1％的恶唑酮（溶于50％的乙醇中）。灌肠后，每天观察小鼠体重，粪便特征和粪便中的血液，以测量疾病活动指数（DAI）得分。灌肠后24、3、7、14和21天后24小时，处死动物，立即打开结肠，沿肠系膜边缘切开肠腔，并清洗结肠。取一部分具有明显病变的结肠组织进行形态学检查，并将一部分组织切碎。测量过氧化物酶（MPO）活性和细胞因子TNF-a，IFN-7，IL-4的含量。 DAI评分标准：①体重，大便特征，潜血或便血都正常：0分。 ②体重减轻1％?5％，大便特征，潜血或大便带血正常：1分。 ③体重减轻5-10％，大便潜血阳性：2分。 ④体重减轻10％至15％，半凳，潜血阳性：3分。 ⑤体重减轻超过15％，大便水样，大便带血：4分。组织学损伤的程度通过上皮损伤，溃疡和炎性细胞浸润等项目的总分来评分。 ①上皮疾病-溃疡形成（溃疡深度）：无：0分；糜烂（粘膜下层）：1分；溃疡（肌层）：2分；溃疡（浆膜层）：3分。 （2）水肿：无：0，轻度：1分，中度：2分，严重度：3分。 ③淋巴，单核和浆细胞浸润（浸润深度）：无：0分；轻度（粘膜下层）：1分；中度（肌肉层）：2分；重度（浆膜层）：3分。 ④中性粒细胞浸润（浸润深度）：无：0分；轻度（粘膜下层）：1分；中（肌层）：2分；重度（浆膜层）：3分。 ⑤嗜酸性粒细胞浸润（浸润深度）：无：0分，轻度（粘膜下层）：1分，中（肌肉层）； 2分，重度（浆膜层）：3分。 MPO活性测量：切除部分患处结肠组织，称重，每200 mg加入1 ml 0.2％的十六烷基三甲基溴化十六烷基三甲基溴化铵（HTAB），匀浆，冻融3次，然后以1083 g离心10分钟。然后，使上清液为0.1ml，并使用邻共轭二茴香胺作为底物，用UV-200UV分光光度计在655mm的波长下每分钟测量5分钟的吸光度变化的平均值。的吸光度值变化为1.0单位酶活性。细胞因子TNF-α，IFN-γ，IL-4含量的测量：切掉一部分患处结肠并称重，称量1 ml PBS（pH 6.0，抑肽酶，亮肽素，胃蛋白酶抑制剂A，各含50 mg）加1ug）匀浆，在4℃下以6500g离心15分钟，取0.1ml上清液，并使用相应试剂盒通过ELISA检查细胞因子TNF-α，IFN-γ，IL-4的含量。测量

　　（2）型号特征：两次施用恶唑酮2天后，施用区域的皮肤可能会出现红肿现象，并且某些皮肤可能会溃疡。灌肠后二十四小时，第三至第四次体重减轻和腹泻每天出现高峰，一些动物大便带血，腹泻持续约一周，然后逐渐变成稀便。 2周后，大便特征恢复正常。另外，灌肠后24小时，出现了远端结肠粘膜的充血和水肿，并且病变持续分布。显微镜检查显示上皮细胞丢失，糜烂和浅表溃疡形成，杯状细胞减少，腺体密度降低以及炎症局限于粘膜和粘膜。可见炎症细胞浸润。在早期阶段，中性粒细胞浸润是主要的。一周后，淋巴细胞，单核细胞和浆细胞浸润，一些嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润。结肠发炎可能会持续约2周。同时，灌肠后24小时，3天和7天，病变结肠组织中MPO活性和IL-4含量明显增加，但TNF-a和IFN-γ含量基本正常。 ..

　　（3）比较医学Oxazolone是一种半抗原。当与皮肤蛋白结合时，它可以形成完整的抗原。由于皮肤树突状细胞即主要组织朗格汉斯细胞（Langerhans cell）的抗原呈递能力强，因此将相容性复合物（MHC）II类分子上的抗原呈递给CD4 + T细胞。这些T细胞增殖形成对半抗原修饰的自身肽特异的T细胞克隆。当人体再次暴露于恶唑酮时，修饰的自身肽再次将MHC II类分子呈递给树突状细胞，记忆T细胞释放细胞因子，触发对这些抗原的免疫反应，并由T细胞介导。它会导致过敏反应延迟并引起肠道炎症。恶唑酮诱导动物结肠炎的使用是新建立的类似人的溃疡性结肠炎模型。有两种制造霉菌的方法，一种是单个灌肠，另一种是先致敏，然后是灌肠。由于前一种方法（3-4天）引起的结肠炎症持续时间短且小鼠死亡率高，因此通常使用后一种方法来创建模型。模型复制法显示，在施用恶唑酮后，动物的局部皮肤发红和肿胀，并且在5天后，当再次通过灌肠再次施用少量恶唑酮时，立即出现肠道炎症。这样，是胃肠道粘膜再次暴露于恶唑酮，它引起的粘膜炎症更加严重并且持续时间更长。该模型简单的建模方法，良好的可重复性以及该模型的组织学特征和炎症分布很好地再现了慢性和复发性特征性炎症以及类似人类疾病的发病机理，以及溃疡性结肠炎的病因和病因。这项研究提供了一种极好的方法，也可用于评估药物的活性和功效。