丙型肝炎病毒,转基因动物模型 中国实验动物信息网 2021-04-02 977

　　(1)复制方法  该方法主要还是通过雄原核显微注射法制备转基因小鼠。为了研究HCV的致病性，科学家们对许多转部分HCV基因的小鼠进行了研究。将包含HCV 5' UTR与结构基因(C1＋E1＋E2)的片段经酶切从pHCS质粒上切下，经中间载体pMT后再酶切，正向插人pcDNA3的 BamHI EcoRI位点(位于CMV启动子下)，质粒命名为 pCBE。用显微注射法将待转基因注入小鼠受精卵雄前核中，注入量为1～2pl/卵，再移植到6周龄的假孕母鼠输卵管中，每侧输卵管20枚左右，待其发育后产仔。

　　(2)模型特点  研究发现，在表达HCV非结构蛋白 Ns5A基因的小鼠中，没有观察到肝组织病变和直接的细胞致病性。在表达HCV核心蛋白的转基因小鼠中*显著的表现是诱发肝脏脂肪变化和肝细胞癌变，这也是许多慢性 HCV感染出现的现象。在转HCV核心蛋白基因的小鼠中，还观察到了由于活性氧种类的增加而引发的脂类过氧化和线粒体DNA损伤的现象，由此推断肝细胞癌变的出现可能与活性氧种类的增多进而损伤DNA有关。同时，在一个转结构基因(Core/E1/E2/P7)和一个转完整HCV ORF的小鼠品系中也观察到了肝脏脂肪变和肝细胞癌变的现象。

　　(3)比较医学  丙型肝炎病毒(HCV)是输血后引起肝炎的主要病原。HCV感染后除可导致急慢性肝炎外，尚可导致肝硬化与肝癌。由于缺乏合适的组织培养系统及广为应用的动物模型，无法对HCV直接损伤肝细胞作用进行研究。故至今有关HCV的发病机制尚未完全弄清，可能是通过病毒的直接作用或宿主对病毒的免疫防御作用机制而引起肝脏的病理改变。而转基因小鼠系统被认为是目前研究基因表达调控的*佳体系，可以同时从空间和时间角度探讨基因的活动规律及其表型效应。HCV结构基因小鼠模型的建立，为HCV全基因转基因小鼠模型的建立并用于研究 HCV感染细胞的机理，在肝细胞内HCV毒株的装配及细胞内转运，HCV基因的复制对肝细胞的毒力作用，以及 HCV结构蛋白在肝内的免疫病理等等，提供了重要的技术保证。