动物造模,药效评价,糖尿病 z-bio 2024-11-28 9

　　1.造模材料  动物：雄性SD大鼠，2个月龄，体重180～220g；药物：链脲佐菌素，枸橼酸钠-柠檬酸缓冲液，阿扑吗啡(apomorphine, APO)。

　　2.造模方法  每只雄性大鼠在进入实验研究之前，均有正常的性功能(由与发情雌鼠交配证实)。每5只一笼，自由饮食，12h/12h昼夜交替饲养。造模的1、2、3组分别饲养6周、8周及12周[自注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)第4天开始算起]。禁食8h后用0.1mol/L枸橼酸钠-柠檬酸缓冲液(pH4.2)，在冰浴中配制新鲜的10mg/ml STZ溶液。1组、2组、3组，每只于左下腹腹腔内注射STZ 55mg/kg。第4天开始每天测尿糖(urine glucose, UG)，处死前一周全部测血糖(blood sugar, BG)及随机部分测糖基血红蛋白(HbAlc)，并随时记录临床变化。根据临床表现，UG、BG及HbAlc综合诊断糖尿病(diabetesmellitus, DM)。余34只大鼠腹腔内注射枸橼酸钠-柠檬酸缓冲液作为空白对照组(NDM组)，注射STZ后未发生DM者作为STZ药物对照组(STZ组)。

　　阴茎勃起实验：在实验期间，大鼠予以称重，然后放在观察箱(36cm×28cm×28cm)内，适应环境10min，室内保持安静，灯光调暗，仅够观察即可。然后每只大鼠在颈项松弛皮肤处注射APO 80μg/kg。APO溶解于0.5mg/kg维生素C及生理盐水中，调整体积为5ml/kg。每只大鼠于注射后立刻观察30min，并予以录像记录阴茎有无勃起、阴茎勃起次数及打呵欠次数。龟头充血及末端阴茎体出为阴茎勃起1次：伸屈、张嘴伴呼吸加快为打呵欠1次。

　　3.造模原理  破坏胰岛β细胞后所造成长期高血糖导致阴茎勃起障碍。

　　4.造模后的变化  利用80μg/kg APO注射6周、8周及12周，3组DM、NDM及STZ大鼠以研究阴茎勃起情况，各组中DM组与后两组相比，阴茎勃起率及阴茎勃起次数均明显降低，而且各组DM相比也有明显差异。说明随DM病程延长阴茎勃起功能明显下降，阳痿比例显著增加：而NAM组与STZ组则100％的阴茎勃起，且勃起次数明显高于DM组，说明在DM动物模型基础上注射APO，然后筛选阳痿病例作为DM性阳痿动物模型，为临床及科研服务行而有效。注射APO后，STZ组大鼠100％的勃起，与NDM组无差异，一则说明STZ对阴茎勃起功能无影响：二则也进一步说明阴茎勃起障碍是STZ破坏胰岛β细胞后所造成长期高血糖的结果。DM组大鼠注射APO后打呵欠的次数与NDM及STZ组相比明显减少。

　　电镜观察结果：对照组：可见分布均匀的血窦、内皮细胞、平滑肌细胞、间质组织、神经组织及微血管腔结构。血窦内见少量红细胞，内衬内皮细胞。内皮细胞质膜完整，细胞之间有紧密或桥粒连接。平滑肌细胞质膜完整，平滑肌之间有基膜将其相互分开。间质组织散在分布其中。三组对照组超微结构相似。DM性ED组：可见分布杂乱的血窦、内皮细胞、大量增生的间质组织、神经组织及微血管结构。血窦腔窄，内可见大量血小板成分。内皮细胞质膜时有破损，其下吞饮小泡明显减少，胞质浓集，其内糖原颗粒、内质网、高尔基复合体及线粒体等细胞器亦明显减少，线粒体堆集、肿胀、间嵴消失、空泡化，内质网扩张、脱颗粒、呈空泡状，内质细胞之间连接时有消失。平滑肌细胞数目明显减少，质膜时有破损，吞饮小泡明显减少，胞质浓密，其内糖原颗粒、内质网、高尔基复合体、微丝、致密小体及线粒体明显减少，线粒体堆集、肿胀、间嵴消失、空泡化，内质网扩张、脱颗粒、呈空泡状，平滑肌之间基膜时有消失。大量增生的间质组织排列紊乱，分布其中。微血管管腔闭塞，内有血栓形成。三组DM性ED组有明显差异，1组改变相对较轻，2组内皮细胞破损较1、3组明显，3组平滑肌细胞改变较1、2组明显，此时不仅有胞质内细胞器的改变，而且细胞核核质浓集，核膜间隙扩张。

　　随DM病程延长，DM性ED组大鼠阴茎海绵体组织一氧化氮合酶(nitricoxide syn- thas，NOS)的活性明显下降。

　　DM性ED大鼠血清睾酮浓度显著降低，与DM病程密切相关：促黄体激素(luteotro- pic hormone, LH)在DM早期无改变、晚期明显降低：促卵泡激素(ollicle-stimulating hormone, FSH)无明显改变。