动物造模,肾小管间质纤维化模型 中国实验动物信息网 2021-03-26 519

　　（1）生殖方法庆大霉素（GM）皮下注射到体重为200至260 g的成年大鼠中，每天两次，连续2天，体重为400 mg/kg。首次注射GM后第2、5、8、11、15、15、22、29天收集大鼠尿液，以收集24小时尿量（UV），尿肌酐（UCr）和钠尿（UNa）。 （CCr）和钠排泄率（FENa），血肌酐（SCr），血尿素氮（BUN）和血钠水平（SNa）收集在其中。麻醉动物并收集肾脏。 ，部分肾脏组织用10％甲醛固定。它包埋在常规石蜡，连续组织切片，常规HE，PAS染色中，并用光学显微镜观察。用透射电子显微镜拍摄肾皮质组织的另一部分，用2.5戊二醛-1.0酸固定，用透射电子显微镜切片，并用电子显微镜观察。

　　（2）模型特征首次注射GM后两天，模型动物的紫外线在24小时后开始增加，在第8天达到峰值，然后下降，并在第22天恢复正常。天。模型动物的尿蛋白逐渐增加，在第5天达到峰值，在8天后继续下降，并在第22天恢复正常。血清肌酐（SGr）逐渐增加并在第11天达到峰值。之后，它急剧下降。在第15天，在注射GM的第2天，血液尿素氮（BUN）略有增加，而在第5天显着增加。在第8天和第11天达到峰值后，血液尿素氮（BUN）迅速下降，并在第22天恢复正常。肌酐清除率（CCr）在第5天开始下降，在第8天略有上升，然后继续下降，在第22天（基本上是第29天）和钠排泄率（FENa）恢复正常。）在第15天达到顶峰，在第22天开始下降，并在第29天基本降至正常水平。天。显微组织病理学观察显示，注射GM后6小时，近端肾小管上皮细胞刷状缘部分脱落；第2天，肾皮质和髓外区定位，可见性炎症细胞浸润，近端小管上皮细胞肿胀。 ..收集真空变性和异常的PAS阳性包涵体，部分刷缘消失。在第5天，肾皮质的近端肾小管上皮细胞经历广泛的坏死，并且管腔充满红色颗粒坏死。类型，管壁似乎没有破裂或压碎，PAS染色的基膜保持完整，少量的近端小管开始在基膜上覆盖一层平坦的上皮细胞。在第8天和第11天，管腔中的坏死物质逐渐减少。旋转小管的再生很明显，上皮细胞逐渐增加和增加，伸入管腔的一些乳头突增生显示有丝分裂。 PAS染色逐渐增加刷状边界；在第15天，EGF处理组的形状接近对照组，仅在基质中可见少量炎性细胞浸润；在第22天，肾内小管腔中的坏死物质消失，上皮细胞以立方体的形式增殖，并且在肾基质中仍可见少量炎性细胞浸润；在第29天，为模型动物的肾脏组织的形态结构。已恢复正常。在建模过程中，远端小管的上皮细胞和肾脏的集合管显示出液泡变性，但无坏死变化，并且在远端小管中发现了一个柱。透射电镜的超微结构观察表明，注射GM后2天，模型动物肾小管的上皮细胞大量微绒毛丧失；胞浆中的次吞噬体显着增加，并且在髓样中发现了许多体型。层状或带状高电子密度，线粒体膨胀，数量减少，并失去基质颗粒。细胞基表面上质膜的内部褶皱变平并且数量减少。在第5天，肾近端小管上皮细胞坏死，管腔是髓质，核和细胞器的完整膜片段；少量在多个延髓体和单个剩余的近端小管上皮中；残余的腔微绒毛细胞；在开始的上皮细胞中在第8天和第11天覆盖近端小管的表面，内腔和基底表面祖细胞膜上逐渐出现粗短的微绒毛，褶皱的内部皱褶逐渐增加；内部核糖体，粗糙的肾小管和在15天之内，上皮细胞的Gordi逐渐增加，髓质减少，线粒体的数量增加；近端小管上皮细胞的内腔开始出现吞咽滤泡；在22天时，仍然有少量的骨髓肾近端小管上皮细胞；在第29天，动物的超微结构恢复正常。

　　（3）比较医学急性肾小管坏死（ATN）是ARF的*重要临床原因，也是临床上重要的疾病之一。庆大霉素（GM）被广泛用作革兰氏阴性细菌感染的有效氨基糖苷类抗生素，但其对肾脏的毒性作用以及引起ATN或ARF的潜力不容忽视。该模型的致病机理是，主要通过肾小球滤过消除了体内的GM，但是一小部分（≤5％）的滤过材料可能会被近端小管重新吸收。含有GM的包涵体被溶酶体吞下，抑制各种膦酸酯脂肪酶的活性，并形成骨髓和骨髓体。身体的形成是转基因肾毒性的敏感指标。同时，GM可以抑制活性。蛋白激酶C的作用改变了线粒体和其他病原体的正常代谢，导致肾小管毒性破坏。 GM对肾小管上皮细胞的坏死程度与剂量有关。低剂量GM引起近端肾小管上皮细胞中大量髓质体的形成，但在显微镜下肾脏组织功能未见明显改变或肾脏形态或肾脏发生明显改变；且高剂量GM可能严重损害肾小管以及严重损害肾小管。在此方法诱导的ATN模型中，坏死和恢复过程中发生了肾小管重吸收功能障碍，导致肾小球滤过率降低。该模型的特点是多尿性肾衰竭，因为肾小管对水和钠的重吸收减少，抵消了肾小球滤过率降低引起的原尿减少。该模型易于制造，成本低，可重复性高，可用于各种急性肾衰竭的临床试验研究。