动物造模,肾小管间质纤维化模型 中国实验动物信息网 2021-03-26 611

　　(1)复制方法  体重为250～300g的成年大鼠，经腹腔注射5％水合氯醛麻醉，麻醉后取仰卧位固定于手术板上。动物腹部手术区常规消毒及去毛，沿腹中线作手术切口，依次切开皮肤和肌肉，游离肾脏和输尿管，用组织钳托起左侧输尿管中段部位，止血钳夹住，在两端用4-0号丝线分两次结扎左侧输尿管近肾盂段，剪断输尿管，然后常规缝合肌肉和皮肤。术后动物常规单笼饲养观察，自由饮水及进食。于术后第7, 14, 21, 28日动物麻醉后右股动脉放血处死，分离血清作生化测定；处死前1d在禁食不禁水的条件下，收集大鼠24h尿液测尿量。取左肾组织标本经固定液固定后，作常规组织切片，光镜下观察。肾小管间质病变由3个参数判定：蛋白管型和肾小管的扩张；间质炎细胞的浸润；间质纤维化的程度。每个参数按0～3分评定：0分：正常；1分：轻度受损；2分：中度受损；3分：重度受损。

　　(2)模型特点  模型大鼠手术后，短期内(术后7～14d)动物可出现血清尿素氮、肌酐测定值明显升高；术后21～28d，血清中尿素氮、肌酐反而下降，但28d时动物血清肌酐值仍高于手术前。表明单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)后肾功能有一个急性失代偿到逐渐通过对侧肾脏代偿，*后对侧肾脏亦失代偿的变化过程，此变化与输尿管梗阻后引起机体肾内压、肾脏血流动力学和肾小球滤过压改变有关。术后28d内，24h尿蛋白排泄量无明显增加。镜下病理组织学观察结果显示，术后3d时，肾组织内已出现炎症细胞浸润、细胞增殖、小管扩张等病理变化，此后动物可发生进行性肾小管萎缩及间质纤维化，但肾小球组织结构无明显病理损伤；PAS染色可见肾组织内弥漫性肾小管基底膜增厚皱缩，马森(Masson)染色可见肾皮质区、皮髓交界处发生明显纤维化。模型制作方法简便，制作时间短，重复性较好，肾间质纤维化发展迅速，可观察到肾脏细胞转分化过程。

　　(3)比较医学  临床上人类肾小管间质纤维化是多种慢性非肿瘤性肾脏疾病长期迁延，*终导致慢性肾功能衰竭的主要病理基础，它以肾小管损伤、肾间质炎症细胞浸润、纤维化为主要特征。由于人类肾问质纤维化的临床病程漫长，病因复杂，加上病理取材的限制，对其病理过程进行动态研究较为困难。建立理想的肾间质纤维化动物模型用于实验研究十分重要。目前常用的肾间质纤维化动物模型复制方法，主要通过药物诱导、免疫介导、肾次全切除、庆大霉素肾小管损伤模型、腺嘌呤致纤维化模型、单侧输尿管结扎、放射损伤、感染等多种方法建立，但在模型的病理特征，造模时间和实验成本方面，这些方法均有各自的局限性。鉴于临床上输尿管梗阻是导致肾纤维化的常见原因之一。结扎大鼠单侧输尿管造成单侧梗阻性肾病，是研究肾间质纤维化的成熟模型。这种模型手术方式通常采用从大鼠背侧入腹，通过对肾蒂及输尿管走行辨认输尿管，并进行肾盂输尿管连接部的结扎。也有研究报道，采用下腹入式行输尿管下段结扎手术，同样可制备大鼠单侧输尿管梗阻模型，且并发症显著低于常规术式，手术简单，时间短，存活率高。采用单侧输尿管结扎方法建立的肾间质纤维化模型，其病理表现特征与梗阻后肾病患者的观察结果类似，与其他方法复制的肾间质纤维化动物模型相比，模型制作方法相对简单，有较好的重复性，纤维化病变发生迅速。本模型对于研究临床上肾纤维化发生机制及药物治疗等方面具有较好的实用价值。