疾病动物模型,围绝经期综合征动物模型 中国实验动物信息网 2021-03-11 1498

　　围绝经期(perimenopausal period)指从接近绝经出现绝经有关的内分泌、生物学和临床特征起至绝经一年内的期间，即绝经过渡期至绝经后一年。围绝经期综合征是由于卵巢功能减退，导致雌激素分泌减少，引起机体内分泌失调、免疫力低下和自主神经功能紊乱的综合征。临床上常见潮热盗汗、月经紊乱、精神状态的变化、心血管与生殖泌尿系统病变及骨质疏松等表现。常用的围绝经期综合征动物模型有卵巢摘除模型、自然老化模型、X线损伤卵巢模型等。

　　一、卵巢摘除动物模型

　　【造模机制】卵巢摘除动物模型(ovariecto- mized animal model)又称去势模型，女性雌激素90％由卵巢分泌，摘除卵巢，切断其来源，可人为地造成雌激素突然降低的环境，来模拟围绝经期综合征。

　　【造模方法】一般常用3～6月龄雌性Sprague Dawley大鼠或Wistar大鼠(小鼠也可)，用戊巴比妥钠或水合氯醛腹腔麻醉后，取*末肋骨下、腋中线和距脊柱外侧约2cm交叉处。剪除长毛，消毒手术野，切开皮肤和背肌约1.5～2.0cm，卵巢位于肾脏外下方，将卵巢下输卵管(包括脂肪)用丝线结扎，摘除卵巢，同法摘除另一侧卵巢。验证卵巢的完整性及切口无出血后，将子宫放回原处，关腹，缝皮。缝合的伤口上涂抹0.5％碘伏并撒适量青霉素钠粉末，并继续在术后第1～3天给每只大鼠腹腔注射1.5ml青霉素生理盐水(4万U/ml)常规抗感染治疗。去卵巢术后一周后，每天逐只进行阴道脱落细胞涂片检查，1次/天，连续5天，以不出现动情期反应为造模成功。

　　【模型特点】

　　1．模型组大鼠连续2周阴道涂片未见发情期改变，仅有发情间期改变，涂片显示有少量核细胞及大量白细胞。

　　2．去势1个月后，模型组大鼠血清激素水平较空白对照组相比，血清雌二醇E2水平降低，促卵泡生成激素FSH水平及促黄体生成激素LH水平升高，子宫指数(子宫重与体重比值)也降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。

　　3．去势6周后，肝细胞轻度肿胀，界限模糊，细胞中可见大量脂滴，个别细胞被脂滴充满；肝窦较混乱、纤细、轻度充血。肝组织匀浆中胆固醇和甘油三酯含量明显增加，大鼠肝脏出现脂类蓄积改变，可作为围绝经期脂质代谢紊乱的模型。

　　4．去势3个月后，相继出现血清降钙素浓度下降，骨吸收增加，骨形成速率变慢，皮质骨变薄，骨髓腔变大，骨小梁数目减少、缺失或断裂，骨髓腔中细胞数目减少，表现出围绝经期骨质疏松的病理特征，是围绝经期骨质疏松较理想的模型。

　　5．出现了围绝经期综合征表现，替代应用外源性雌激素可以缓解这些症状。

　　【模型评估和应用】模型鼠没有自然衰老过程，其他各个系统均为青年，与围绝经期机体老化尚有一定差距，且卵巢的彻底切除与围绝经期鼠卵巢功能的衰竭也有所不同。但是，本模型阴道脱落细胞涂片及血清性激素水平均有围绝经期改变，所以本模型的建立是成功的。另外，本模型建模时间短，模型成功率高，所用动物比老年大鼠廉价易得，节省成本，应用方便，为科研工作者广为采用，常用于围绝经期综合征病因、发病机制及治疗的研究，筛选和开发有效的治疗药物。

　　二、自然老化动物模型

　　【造模机制】12月龄前后(11～13月龄)的雌性大鼠，开始出现动情周期紊乱，血清学及卵巢相应的生化指标等均显示，该阶段大鼠卵巢的生殖功能呈进行性衰退的改变，与女性围绝经期表现极为相似，可作为围绝经期卵巢衰老研究的动物模型。

　　【造模方法】12月龄前后的雌性Sprague- Dawley大鼠或Wistar大鼠若干只，连续阴道细胞学观察15天，选取动情周期出现了延长及紊乱表现的为模型组，包括动情周期延长，之后持续动情，反复假妊娠。大鼠性成熟后，动情周期每经4～5昼夜节律性地重复一次，在这个过程中卵巢的卵泡、子宫和阴道上皮都经历着周期性的变化，动情期可见大而淡染的无核角化细胞，动情间期阴道上皮逐渐增厚，细胞间有许多白细胞。阴道脱落细胞涂片方法：左手背位固定大鼠，右手持吸管，其内预先吸入生理盐水0.1～0.2ml。轻轻插入大鼠阴道内0.5～1cm，抽吸2～3次，滴一滴吸液于载玻片上。然后滴一滴95％乙醇溶液，晾干后以1％亚甲蓝染色10分钟，用水冲洗多余染液。吹干后置于显微镜下进行细胞学检查。逐只进行阴道涂片检查，每天1次，连续15天。

　　【模型特点】

　　1．卵巢组织的形态学观察

　　(1)光镜观察结果：青年对照组大鼠卵巢发育成熟，皮质、髓质层次分明，其中各级卵泡及黄体数量均较多。卵泡液丰富，可见少量闭锁卵泡及间质腺。模型组大鼠卵巢萎缩，发育较差，髓质增多，原始卵泡和生长卵泡均明显减少，颗粒细胞排列不规整，可见颗粒细胞的崩解，未见典型的成熟卵泡，闭锁卵泡数量增加；成熟黄体数量也较少，而退化黄体数目增多，间质腺少而疏松，可见纤维组织增生或崩解，血管数量减少，小动脉管腔狭窄、堵塞。

　　(2)电镜观察结果：青年组对照卵巢原始卵泡丰富，卵母细胞体积较大，核质均匀、核仁明显，周围单层颗粒细胞核不规则，核膜内有薄层异染色体；生长卵泡中可见透明带增宽，颗粒细胞呈多层分布，核大淡染，核仁明显，染色质均匀，细胞器完整，轮廓清晰，胞质中细胞器丰富，可见分泌颗粒；细胞间有窦状间隙。模型组卵巢颗粒细胞中有较多空泡，分泌颗粒减少，其中可见致密物，滑面内质网不丰富，细胞间的窦状间隙增大；间质可见纤维、基质溶解。

　　2．模型组与青年对照组相比，血清促卵泡生成激素FSH、促黄体生成素LH、促性腺激素释放激素GnRH水平升高，血清雌激素E2水平降低；模型组较青年对照组卵巢指数与子宫指数显著降低；以上均有显著差异(P<0.05)。

　　3．围绝经期妇女由于卵巢功能衰退，雌激素水平下降，血中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇增加。而血脂代谢异常是导致动脉粥样硬化(atheroscbrasis)、冠心病(coronary heart disease)的主要原因。本模型动物的血清总胆固醇、血清甘油三酯、血清高密度脂蛋白胆固醇、血清低密度脂蛋白胆固醇等水平均与青年组有显著差异，非常符合围绝经期的特点，本模型是成功的。

　　【模型评估和应用】自然老化模型与人围绝经期生物学特性相仿，有自然的衰老过程，是卵巢功能的衰竭而不是卵巢摘除(去势)，所以更接近于事实本身，是较为理想的模型。缺点是周期长，费用高。

　　三、X线损伤卵巢动物模型

　　【造模机制】X线损伤卵巢动物模型(animal model of ovary hurt by X-ray)是用X线照射破坏卵巢所致症状来反映围绝经期的主要临床表现。

　　【造模方法】Wistar大鼠，150～180g，将大鼠固定于平板上，暴露下腹部“卵巢区”，置于电子直线加速器2100C照射野下，野宽距4cm，剂量率4Gy/min，以高能X线(6Mev)照射2.5分钟，总剂量9Gy。

　　【模型特点】

　　1．X线照射后3～5天，大鼠出现明显放射性肠炎症状，且有少数动物死亡。

　　2．照射后第10天起体重明显减轻，照射后21天大鼠子宫、卵巢重量显著降低，垂体重量明显升高，提示卵巢受到损伤后，垂体反馈性增殖。

　　3．自主活动显著增多，甘油三酯和胆固醇含量明显升高等。

　　【模型评估和应用】这种方法由于实验室设备和条件的限制，以及照射时间、强度不好掌握，因而减小了其应用范围。