目的;建立液滴数字PCR(ddPCR)作为准确检测艾滋病动物模型细胞和组织中SIVDNA含量的重要指标,以实时,动态地评估水库中的隐藏病毒。
方法:根据成熟的qPCR方法,优化液滴dPCR的反应条件以确定*佳退火温度。 ddPCR的检测范围通过检测pGEM-SIVgag477质粒标准品的10倍系列稀释液来确定。另外,通过多次检测多个DNA样品来判断检测方法的稳定性。
结果:ddPCR的退火温度为60°C,检测范围为0.3-3.96×104拷贝/μL,液滴dPCR和qPCR具有良好的相关性,相关系数为r = 0.9981。
结论:本研究建立了基于液滴dPCR的SIV病毒DNA绝对定量方法。这可以有效地对细胞和组织病毒库样品中的病毒DNA负载进行动态绝对定量分析,从而显着改善模型应用程序的评估。