目的:探讨Smad2/3a对脊椎动物神经嵴细胞发育的影响。
方法:通过在斑马鱼胚胎单细胞时期 显微注射 smad2/3吗啉环修饰的反义寡核苷酸的方法,特异性敲降 smad2/3基因的表达,至胚胎发育至6体节,利 用整胚原位杂交检测神经嵴细胞特异性标记基因snail1b,sox10,foxd3和crestin 的表达情况;通过casmad2mRNA和 smad3amRNA显微注射的方法过表达 smad2和 smad3a,同样利用整胚原位杂交检测神经嵴细胞特异性标记基因 crestin的表达情况;通过过表达 casmad2及 smad3a 对下调 smad2和 smad3a 的胚胎进行挽救。
结果:smad2/3a 被 敲低后,crestin 的表达量显著降低,而 snail1b,sox10 和 foxd3 的表达量无明显变化。 smad3b 被敲低后,crestin, snail1b,sox10和 foxd3的表达量均无明显变化;过表达 casmad2和 smad3a 均可导致 crestin 的表达量增高;过表达 casmad2和smad3a 可挽救由于smad2/3a 敲降所造成crestin 的低表达量。
结论:Smad2和Smad3a对神经嵴细胞标 记基因 crestin 的表达具有重要作用。