动物实验,荧光定量PCR检 中国实验动物信息网 2020-10-27 399

　　目的  建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。

　　方法  针对多种大、小鼠易感支原体的16 s rRNA基因中较保守的区域设计1对引物和探针，建立荧光定量 PCR方法并检测其特异性、灵敏性及重复性。

　　结果 该方法在模板浓度为5×100-5×106copies/μL之间呈良好的线性关系（R²=0.9972）且扩增效率为98.11%;特异性强，能够区分检测金黄色葡萄球菌等常见的病原菌;灵敏性高，检测下限为5copies/μL.比常规PCR的检测灵敏性高100倍;重复性好，对不同浓度模板进行组内和组间重复性试验的变异系数均低于2%。用荧光定量PCR和普通PCR方法对不同来源不同类型的120份临床样品进行检测，结果表明小鼠支原体检测阳性率分别为3.33%（2/60）、1.67%（1/60），细胞样品支原体检测阳性率均为5%（3/60）。

　　结论  本研究建立的荧光定量PCR方法快速、特异强、灵敏性高、重复性好，可用于实验动物常见支原体的快速诊断。