该怎么制备移植性肿瘤动物模型？

移植性肿瘤动物模型

中国实验动物信息网

2020-10-14

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　　（1）非实体瘤细胞移植模型

　　在小鼠腹腔中培养和传代的临床白血病患者的血液样品，骨髓样品或非固体肿瘤腹水样品是等量的平衡盐溶液（PBS等）。或者，加入生理盐水并充分混合，离心后分离肿瘤细胞。当在体外悬浮培养中培养非固体肿瘤细胞时，直接收集包含肿瘤细胞的培养液并离心以获得肿瘤细胞。离心的速度和时间为800-1500/min，5分钟。从临床白血病患者的血液样本和骨髓样本中收集的肿瘤细胞通常含有红细胞，并用溶血剂（0.83％NH4Cl等）将红细胞压碎，然后在平衡盐溶液中离心细胞。冲洗以处置溶血红蛋白和碎屑。从上述各种来源收集肿瘤细胞后，用无血清培养液或平衡盐溶液分别在小鼠或腹部或小鼠的腹部或尾静脉中将其浓度调节至（1×1000000？1×10000000）/ ml。注射SCID小鼠。小鼠0.2-0.5毫升。接种量取决于细胞的恶性程度。通常需要大量注入临床标本中的肿瘤细胞和低度肿瘤细胞，而不是小剂量。接种后七至十天，小鼠腹部增大或检测到血液中的肿瘤细胞。

　　另外，在成功腹膜内接种小鼠后，可以提取小鼠腹水以分离肿瘤细胞，然后皮下接种以建立实体瘤移植模型（以下实体瘤细胞）请参阅创建移植模型。

　　（2）实体肿瘤细胞移植模型

　　临床肿瘤组织或已成功移植并传给动物的肿瘤组织应用平衡盐溶液彻底清洗，以去除血迹和周围环境非肿瘤组织应先干净地切开，然后再切细。（切口越小越好）；将其完全悬浮在平衡的盐溶液中，将其转移至离心管中，在室温下放置5分钟；丢弃含有细胞碎片的灌洗液顶层，并去除小的肿瘤组织留下沉淀；*后浸泡并消化：用5-10倍肿瘤组织消化液的量重悬肿瘤组织沉淀物，然后用移液管将其均匀吸干。同时，将其在37°C下放置30分钟，每5分钟摇动一次。用等量的含血清培养液完成消化。在室温下静置5分钟，收集上层中含有细胞的悬浮液，并将其放入另一个离心管中。较小的，未完全消化的基础肿瘤组织可以再次浸没和消化。收集肿瘤细胞悬液数次，以800-1000/min离心5分钟，弃去上层液体以留下细胞沉淀，将细胞悬浮于完整培养液中并均匀吸液。执行细胞计数并调整细胞浓度。它超过1 x 10000000/ml，并且*终将动物皮下或原位接种。接种的细胞数为1000000-10000000细胞，皮下接种量为0.2-0.3 ml，原位接种量为20-500μl。用于液浸消化的消化液与不同组织的肿瘤不同。用胰蛋白酶（PBS）制备源自普通器官的肿瘤组织，并将其用于源自神经组织或基质组织的肿瘤组织（胶原酶（无血清培养基）制剂）。通常，接种后大约需要10天才能检测到肿瘤细胞的生长。