如何正确DNA提取？

DNA提取

中国实验动物信息网

2020-10-14

425

　　（1）去除材料，用液氮研磨成粉末，然后迅速转移到1.5 ml Eppendorff管中；

　　（2）加入800μlCTAB提取缓冲液并充分混合（CTAB在65°C的水浴中预热）每5分钟轻轻摇动几次，然后在20分钟后以12000r/min的速度离心15分钟；

　　（3）小心吸出上清液和等量的苯酚：氯仿（每次400μl）。）加入溶液，充分混合，并在4°C下以12000r/min离心10分钟。

　　（4）小心吸出上清液，加入等量的氯仿，充分混合并在4°C下以12000r/min的速度离心10分钟；

　　（5）防止出现蛋白质层的步骤重复（4）一次或两次。

　　（6）取上清液，在-20°C下静置1小时，4°C，12000r/min并离心10分钟；

　　（7）弃去上清液和70％的沉淀物用乙醇洗涤两次；

　　（8）在室温下干燥（通常5-15分钟）后，溶于30-50μlDEPC去离子水和-20°C或-70中以备后用储存在°C。

　　2.2.1样品处理：

　　（1）细胞培养：收集1-5 x 107细胞，转移至1.5 ml离心管中，加入1 ml三溶胶，充分混合，然后在室温下放置5分钟。

　　（2）组织：取50-100 mg组织（新鲜或在-70°C和液氮中存储），置于1.5 ml离心管中，加入1 ml三醇进行匀浆，并在室温下5等一下

　　2.2.2提取步骤：

　　（1）加入0.2 ml氯仿，振摇15秒钟，放置2分钟。

　　（2）在4℃，12000g×15分钟下离心以除去上清液。

　　（3）加入0.5毫升异丙醇，将液体在试管中轻轻混合，并在室温下放置10分钟。

　　（4）在4℃，12000g×10分钟下离心并丢弃上清液。

　　（5）加入1 ml的75％乙醇，然后轻轻洗涤沉淀物。弃去上清液于4°C，7500g x 5分钟。（6）干燥并加入适量的DEPCH2O溶解（在65°C下10-15分钟）。