怎么制备腹部辐射致肠粘膜屏障损伤相关动物模型呢？

辐射致肠粘膜屏障损伤,动物模型

中国实验动物信息网

2020-10-14

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　　腹部辐射会导致严重的肠粘膜屏障损害，例如放射性肠炎，辐射损伤是肠粘膜屏障损伤的主要原因之一、包括增殖性隐窝细胞死亡，肠细菌迁移，粘膜溃疡，坏死，出血，肠梗阻，肠造口，脓肿形成，腹膜炎。可能导致它。致命的并发症，如败血症和多器官衰竭。关于放射线肠粘膜屏障损伤例如放射性肠炎的预防和治疗已经进行了广泛的研究，但是仍然缺乏具体的治疗方法。这与对放射性肠炎并发症的组织学，病理学和病因学的了解不完全有关，并且大多数适合临床研究的学者都没有认识到放射性肠炎模型。在这项研究中，我们全面地根据发病率，死亡率，组织病理学特征和文献对放射性肠炎模型的要求（由于临床腹部放疗引起的肠粘膜屏障损害而导致的放射性肠炎）进行了研究，并且更适合临床使用且稳定。建立模型。所研究的SD大鼠放射性肠炎的肠粘膜屏障损伤模型已成功地用于长期TPN的研究，以治疗放射线诱发的肠粘膜屏障损伤。

　　[材料和方法]

　　一。与动物

　　雄性Sprague-Dawly大鼠分组，重210-260克，总共26只。实验前三天将它们存放在实验室中以适应环境。将实验室的室温控制在20-22°C，在12小时的明暗环境下进行12小时。随机分为3组。 A组为常规对照组（n = 8），并喂以标准大鼠食物（Chow）。通过腹腔注射100 mg/kg的氯胺酮麻醉实验组的大鼠，然后从胸骨的Xifoid投影到the骨（距离钴源170 cm）对腹部进行60C0照射（AR）。曾经有。钴源以每分钟16次的速度旋转，以在大鼠的腹部获得均匀的辐射场，其余的身体被5厘米厚的铅块屏蔽。实验成分为B组（n = 9），辐射剂量为8.5 Gy，C组（n = 9），辐射剂量为9.5 Gy。所有剂量服用8分钟58秒。将大鼠置于笼中并自由移动并用标准大鼠饲料喂养。死亡后不久取死大鼠标本，放疗后4天将存活的大鼠杀死，观察肠系膜淋巴结的细菌迁移率和肠粘膜的形态结构。完成了。

　　2、通过腹膜内注射麻醉氯胺酮细菌，在无菌条件下做中线切口，收集肠系膜淋巴结0.5g，匀浆无菌生理盐水1ml，置于人TSB培养基中。 ..观察肠系膜淋巴结的细菌迁移。

　　3、检测肠粘膜的形态和结构

　　从弯曲韧带上取10 cm 2 cm肠段，用Carnoy溶液肠扩张法固定，并用Feulgen染色以检测肠的活力。肠的生存能力通过肠面积计数来测量。计算。将2 cm小肠标本用10％福尔马林固定，并使用6μm石蜡切片进行光学显微镜观察和图像分析。计算机图像分析仪（EMIAS Medical真彩色图像分析仪）用于测量3个非连续切片上10个绒毛中每个绒毛的高度和面积，并使用平均值表示。做到了取一个1 x 1 x 2 mm的小肠样本，用3％的戊二醛和1％的鹅酸固定，并用丙酮梯度脱水。将纯净的Epon812浸入37°C的夜间，在60°C聚合，然后用7％的乙酸铀酰和柠檬酸铅对超薄切片（500-700A）进行染色，并在透射电子显微镜下观察。取样一个5 x 5 x 1 mm的小肠样本，以3％的戊二醛为前缀，后以1％的鹅酸固定，进行乙醇梯度脱水，然后将临界点干燥并真空干燥。真空镀膜设备，用于扫描电子显微镜观察的镀膜。

　　IV。统计和分析

　　SPLM软件执行统计数据分析和处理。 t检验，P\u003c0.05、显示出显着差异。

　　[结果]

　　一个。死亡率 B和C组的所有死亡大鼠均在4天内死亡。对照组没有死亡。

　　2、形态学检查所有死亡的大鼠的肠壁变薄，粘膜出血，溃疡和穿孔程度不同。

　　三。肠系膜淋巴结（MLN）的细菌迁移率

　　[讨论]

　　辐射诱发的肠粘膜屏障损害是主动的（例如盆腔腹部疾病的放射治疗）或被动的（在和平与战争中发生事故）由辐射引起的损坏引起。小肠是其粘膜上皮的生长和代谢所破坏的主要器官，并且对离子辐射（例如腹部放疗后的放射性肠炎）*敏感。 Yeoh等。报告指出，几乎所有患者在盆腔和腹部放疗期间都出现胃肠道症状，尤其是腹泻。严重的急性放射性肠炎的发生率可超过20％，据报道高达70％。慢性放射性肠炎的发生率可达到15％或更高。根据临床观察数据，重度放射性肠炎患者的穿孔等直接原因导致的死亡率可达到22％至26％，而死亡率是主要原因（例如复杂感染）之一。可以达到39％。辐射引起的肠粘膜屏障损害的病因很复杂，尚未完全了解。主要病理变化是增殖性隐窝细胞破坏，绒毛高度降低，黏膜萎缩，溃疡，肠黏膜屏障破坏和细菌迁移。这种粘膜损伤表现为脂肪，乳酸，胆汁盐，维生素B12吸收不良以及肠通透性增加。小肠系列放射患者的研究表明，广泛的组织学变化不涉及广泛的临床表现，即组织学异常与症状和功能的变化不匹配。但是，大多数患者的肠道通透性发生了变化，通透性增加会导致肠道细菌迁移，这是MOF的主要原因。辐射引起的肠粘膜屏障损伤如放射性肠炎的治疗效果通常不足，特别是因为受辐照的肠道容易出现并发症。这与对放射性肠炎中肠粘膜损伤的发展和发展的组织病理学了解不足，以及缺乏稳定，可靠和可察觉的放射性肠炎模型有关。预防和治疗放射性肠炎的模型不同。布鲁克等。报道了4.25 Gy和10 Gy60Co辐射在C3H/HeN小鼠辐射性肠炎模型中的应用，该研究研究了offlocacin和青霉素G以及喹诺酮与格列肽的组合，以减少肠道细菌的迁移和死亡率。 Klimberg，Souba和其他人使用谷氨酰胺来减少由腹部辐射引起的对肠粘膜的损害，减少细菌在肠系膜淋巴结中的迁移，并降低死亡率。肠粘膜损伤模型。在研究含谷氨酰胺二肽的完全肠胃外营养对急性放射性肠炎的营养作用时，马建明等人使用了腹部经8.5 Gy60Co辐射的大鼠模型。建立放射性肠炎的模型各种文献和所用动物中报道的辐射剂量并不完全一致，但通常认为必须满足以下要求： 1）可再现的肠道粘膜组织学损伤； 2）与肠系膜淋巴结相关的细菌移位； 3）严重的放射性肠炎死亡率与临床死亡率相当或略高。在放射性肠炎肠粘膜屏障损害的预防和治疗中，基于对放射性肠粘膜屏障的组织病理学损害有充分了解的稳定的动物模型对其预防和治疗研究非常重要。在这项研究中，SD大鼠的死亡率和体重的变化是通过在小肠标本中经腹部总辐射8.5 Gy和9.5 Gy60 Co辐照引起的肠粘膜损伤，肠腺活力，绒毛高度和面积以及回肠淋巴结来测量的与细菌的迁移率相比。 ..这表明由9.5 Gy60Co全腹照射产生的大鼠放射性肠炎模型是用于临床放射性肠炎肠粘膜屏障损伤预防和治疗研究的合适动物模型。