采集实验动物血液 中国实验动物信息网 2020-10-13 753

　　实验研究中，经常要采集实验动物的血液进行常规检查或某些生物化学分析，故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数，血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。如研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH以及K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。采血时要注意：①采血场所有充足的光线；室温夏季*好保持在25～28℃，冬季以15～20℃为宜；②采血用具与采用部位一般需要进行消毒；③采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；④若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。现将采血方法按动物和部位分别加以介绍。

　　(一)小鼠、大鼠采血法

　　1．割(剪)尾采血  当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3～0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部做一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每只鼠一般可采血10余次。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。

　　2．鼠尾刺血法  大鼠用血量不多时(仅做白细胞计数或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用乙醇消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。

　　3．眼眶静脉丛采血  采血者的左手拇、示两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及示指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5～1.0mm)，使采血器与鼠面呈450的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转1800使斜面对着眼眶后界。刺入深度，小鼠为2～3mm，大鼠4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出0.1～0.5mm，边退边抽。若穿刺适当，血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。

　　若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左、右两眼轮换更好。体重20～25g的小鼠每次可采血0.2～0.3ml；体重200～300g大鼠每次可采血0.5～1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。

　　4．断头取血  采血者的左手拇指和示指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并做动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，1／2～4／5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采血0.8～1.2ml，大鼠5～10ml。

　　5．心脏采血  鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物做深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠采血0.5～0.6ml，大鼠0.8～1.2ml。

　　6．颈动静脉采血  先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。

　　7．腹主动脉采血  *好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀剪断动脉，使血液喷入盛器。

　　8．股动(静)脉采血  先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15～20g的小鼠采血0.2～0.8ml，大鼠0.4～0.6ml。

　　(二)豚鼠采血法

　　1．耳缘剪口采血  将耳消毒后，用锐器(刀或刀片)割破耳缘，在切口边缘涂抹20％枸橼酸钠溶液，阻止血凝，则血可自切口自动流出，进入盛器。操作时，使耳充血效果较好。此法能采血0.5ml左右。

　　2．心脏采血  取血前应探明心脏搏动*强部位，通常在胸骨左缘的正中，选心跳*明显的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小，一般可不必将动物固定在解剖台上，而可由助手握住前后肢进行采血即可。成年豚鼠每周采血应不超过10ml为宜。

　　3．肌动脉采血  将动物仰位固定在手术台上，剪去腹股沟区的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切开长2～3cm的皮肤，使股动脉暴露及分离。然后，用镊子提起股动脉，远端结扎，近端用止血钳夹住，在动脉中央剪一小孔，用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放开止血钳，血液即导管口流出。一次可采血10～20ml。

　　4．背中足静脉取血  助手固定动物，将其右或左、右膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用乙醇消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和示指拉住豚鼠的趾端，右手拿注射针刺入静脉。拔针后立即出血，呈半球状隆起。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢交替使用。

　　(三)免采血法

　　1．耳静脉采血  本法为*常用的取血法之一，常作多次反复取血用，因此，保护耳缘静脉、防止发生栓塞特别重要。将兔放入仅露出头部及两耳的固定盒中，或由助手以手扶住。选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的毛拔去，用75％乙醇局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，用连有5(1／2)号针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管，待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血，此种采血法一次*多可采血5～10ml。

　　2．耳中央动脉采血  将兔置于兔固定筒内，在兔耳的中央有一条较粗、颜色较鲜红的中央动脉，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入动脉，即可见动脉血进入针筒，取血完毕后注意止血。此法一次抽血可达15ml。但抽血时应注意，由于兔耳中央动脉容易发生痉挛性收缩，因此抽血前必须先让兔耳充分充血，当动脉扩张，未发生痉挛性收缩之前立即进行抽血，如果等待时间过长，动脉经常会发生较长时间的痉挛性收缩。取血用的针头一般用6号针头，不要太细。针刺部位从中央动脉末端开始。不要在近耳根部取血，因耳根部软组织厚，血管位置略深，易刺透血管造成皮下出血。

　　3．心脏取血  将家兔仰卧同定，在第3肋间胸骨左缘3mm处注射针垂直刺入心脏，血液随即进入针管。注意事项有：①动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固；②如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点；③在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心、肺，一次可取血20～25ml。

　　4．后肢胫部皮下静脉取血  将兔仰卧固定于兔固定板上，或由一人将兔固定好。拔去胫部被毛，在胫部上端股部扎以橡皮管，则在胫部外侧浅表皮下可清楚见到皮下静脉。用左手两指固定好静脉，有手取带有5(1／2)号针头的注射器在内皮下静脉平行方向刺入血管，抽一下针栓，如血进入注射器，表示针头已刺入血管，即可取血。一次可取2～5ml。取血完后必须用棉球压迫取血部位止血，时间要略长些，因此处不易止血。如止血不妥，可造成皮下血肿，影响连续多次取血。

　　5．股静脉、颈静脉取血  先做股静脉和颈静脉暴露分离手术。

　　(1)股静脉取血：注射器平行于血管，从股静脉下端向心方向刺入，徐徐抽动针栓即可取血。抽血完毕后要注意止血。股静脉较易止血，用于纱布轻压取血部位即可。若连续多次取血，取血部位宜尽量选择靠近离心端。

　　(2)外颈静脉取血：注射器由近心端(距颈静脉分支2～3cm处)向头侧端顺血管平行方向刺入，使注射针一直伸至颈静脉分支处，即可取血。此处血管较粗，很容易取血，取血量也较多，一次可取10ml以上。取血完毕，拔出针头，用干纱布轻轻压迫取血部位也易止血。兔急性实验的静脉取血用此法较方便。