动物造模,阿尔茨海默病 中国实验动物信息网 2022-02-02 581

　　主要在Morris水迷宫实验系统中测试了啮齿动物AD模型的学习和记忆能力的标杆行为评估。下面，我们介绍水迷宫系统的配置，测试程序和评估方法。

　　一个，莫里斯水迷宫购买测试

　　莫里斯水迷宫实验系统包括一个循环池和一个自动图像采集与处理系统。自动图像采集与处理系统主要由摄像头，计算机和图像监控器组成，当动物入水时启动监控装置。实验后记录动物轨迹，并自动分析和报告相关参数。

　　莫里斯水迷宫

　　莫里斯水迷宫是一个圆形铁桶，其圆形平台的直径为100厘米，高度为50-60厘米，深度为30-40厘米，直径为9厘米。它被藏在2厘米深的水下。泳池内不得有任何标记。将适量的新鲜牛奶或奶粉添加到水中，使其看起来不透明和乳白色。在铲斗的顶部，将东，南，西和北四个标记点设置为与动物进入点相同的距离。在铲斗的表面和底部使用这四个入口点的投影点来使曲面和铲斗相等。它分为四个象限。该平台可根据实验要求任意居中于特定象限。使用合适的恒温器设备将水温保持在23-25°C。迷宫水池必须配备适当的注水和排水设施。找到泳池后，不要轻易更换泳池，尤其是在进行相同的水迷宫测试时。自动水迷宫图像采集和处理系统自动收集动物进入水位，游泳速度，寻找目标所需的时间，运行轨迹和搜索策略以及其他参数，并收集各种收集的数据。您可以对其进行统计和分析。设备有限的实验室仍可以使用西欧许多实验室仍在使用的手动记录方法。

　　1.实验方法和步骤实验培训阶段为期3天。我们每天训练四次。在训练过程中，将老鼠从面对泳池壁的四个入口点放置在泳池中，并以秒为单位表示老鼠进入水中并在水中找到一个隐藏的平台站立所需的时间（以秒为单位）。记录为潜伏期。大鼠找到平台后，将其放在平台上10秒钟。如果大鼠在入水60秒后找不到平台，则将其从水中轻轻拖到平台上并停留10秒钟，然后再进行下一次锻炼。在一次训练中，每只大鼠从四个进水点汇入，训练间隔为30秒。

　　2.实验项目

　　（1）地点导航：用于测量大鼠学习和记忆水迷宫的能力。实验涉及观察和记录路线图以及老鼠找到并爬上平台所需的时间。即，记录潜伏期。

　　（2）Spatialprobetest：用于测量大鼠在学习找到平台后保留平台空间位置记忆的能力。定位和导航实验完成后，移开平台并将其放在水中的同一入口处，以测量首次到达原始平台的时间和通过原始平台的次数。 （3）空间可分辨性实验：用于测量大鼠空间可分辨性的双平台实验。我们在水迷宫中设置了两个可见的平台，它们看起来相同（“视觉区别”除外），但是位置不同（空间差异）。一个不沉没（安全平台），另一个不沉没（伪安全平台）。记录大鼠中正确反应的次数，即在一定数量的实验中大鼠到达安全平台而不触摸伪安全平台的次数。显然，“正确的响应”越多，空间区分能力就越高。

　　3.注意事项

　　（1）当老鼠搜寻目标时，实验室的环境和实验者的位置可以作为参考。因此。实验室设备和实验者的位置应相对固定。

　　（2）水迷宫实验室应保持柔软，甚至光线充足且安静。 （两个）评级 莫里斯水迷宫实验允许实验动物学习在水中发现隐藏的平台，并通过分析寻找平台的时间和路径来确定其记忆功能是一种实验性的方法记忆的标准实验是研究空间学习。莫里斯水迷宫不仅用于研究与空间学习和记忆有关的脑功能评估，而且还用于评估相关药物，环境，基因，电磁辐射等对学习和记忆的影响。我会。此实验简单可靠。

　　二。 Y形迷宫实验

　　建立条件反射被用来测试国内外的动物行为和高级脑功能。 Y迷宫法可以同时观察动物规避条件和空间歧视的能力，其结构简单，价格低廉，不受气候变化影响，可以满足某些特殊需求。 （将电极植入大鼠头部以测量EEG或诱发脑诱发电位不适合于水迷宫）。因此，它在中国被广泛使用。例如，在探索痴呆的病因并观察药物的作用时，要确定建模是否成功，或者根据学习和记忆能力的变化确定药物是否可用，大鼠主要用作进行V形电迷宫测试的实验对象。

　　（1）Y形迷宫的结构和原理

　　Y形迷宫也称为三部分径向迷宫盒。它由长度相等的臂I，II和III和三个连接区域组成。盒子的底部是一个直径为0.2厘米，长度为14厘米，间距为1厘米的电网臂。内壁覆盖着一层导电铜。 45厘米长，顶部各有15瓦刺激光。 Y形迷宫操作面板具有四个按钮：电压操作按钮，延迟操作按钮和4→II→III→0。分别按I，II或III键时，相应机械臂的信号灯点亮。此时，没有为机械臂的安全区域（红灯区域）通电，没有照明的两个机械臂和接合区域被通电，成为非安全区域（电击区域）。 ）;按下0按钮时，三个臂未通电，但接合区域已通电。在实验开始时，将大鼠在起始区域（大鼠开始的手臂）适应3.5分钟，然后按特定的规则或随机开关以更改安全区和休克区的位置，并将动物置于休克区。逃逸并观察安全进入区域反应空间。训练开始时，在电击（被动回避反应）的影响下，大鼠可能会被电击进入非安全区，从起始区逃脱并*终进入安全区，从而导致错误反应表示。经过多次训练后，如果未开始电刺激，则安全区灯会亮起，并且大鼠会立即逃到安全区。这是为了形成明暗的辨别性反射（主动回避反应）。

　　（2）正确性判断的标准

　　（1）电击大鼠后，从起始区域逃逸到安全区域是正确的反应。在没有光照的情况下逃到另一只手臂将被记录为错误反应。

　　（2）老鼠在脚底通电后10秒钟内跑到安全区域是正确的反应，否则是错误的反应。后者考虑了可以反映大鼠反应时间长度的时间因素。此外，两者都强调“直接”或“一次性”。也就是说，如果老鼠逃脱到它所在的起始区域，则将其归类为错误响应。

　　（三个）观察指标

　　1.达到标准所需的训练次数（电击次数，反应次数，测试次数），动物学会达到社会标准用于表示空间分辨响应的学习和记忆性能，具体取决于之前所需的测试次数。所需次数越少表示学习速度越快或学习能力越高，所需次数越多表示学习能力和记忆能力越低。

　　2.达到标准所需的天数（天）记录每只大鼠达到学术标准所需要的天数。平均达到标准所需的时间越长，达到学术标准所需的时间就越长。其次，学习和记忆性能降低。

　　3. errornumber（EN）在实验日完成的所有反应的错误响应数。  4.总反应时间（TRT）动物的反应时间（等待时间）是指大鼠在打开信号灯后*次逃脱到照明区域所花费的时间。每日总反应时间是在实验日（全天）完成所有反应（包括正确和错误反应）所需的时间。 EN反映了大鼠的反应准确性，TRT反映了大鼠反应时间的长度，可以全面评估大鼠的学习能力和记忆能力。

　　5.主动逃避频率指示灯打开但未通电后，大鼠在5秒内完成逃避反应的次数占响应总数。如果安全区灯亮并且未开始电刺激，则大鼠逃到了安全区。这表明大鼠形成了浅暗的判别性反射（主动回避反应）。

　　6.正确响应率（正确操作率）正确响应与测试总数的比率。

　　7.整个组的正确比率是所学动物数量与该组动物总数之比。  8.3d学习率训练第三天达到学习标准的动物百分比占该组动物的总数。

　　（4）符合条件（社会）的条件

　　①社会的条件是连续10次回答9次以上（正确回答率≥90％）。 ②连续10次正确触电。 ③按照社会标准，连续纠正18次或20次以上（动作正确回答率≥90％）。 （4）在每个实验日进行20次训练试验，以EN≤2倍且TRT≤120 s作为判断大鼠学习的标准。以上是每只大鼠达到标准（学习）的标准，而整组大鼠达到标准（学习）的标准是整个组的正确率（学习动物的数量/组）。 x 100％内的动物总数大于85％。

　　（五）训练方法

　　1.筛选（预选）

　　（1）将大鼠放在Y型迷宫中3-5分钟，并施加适当的电力，直到探索并进入所有三个手臂。吓一跳选择一种活动的，对电击敏感的并且可以快速逃脱并响应测试的传感器。移开太迟或特别敏感的老鼠。

　　（2）预选大鼠，它们连续两次获得正确的反应，电击的数量≤3、并且对实验性电击更敏感。 （3）根据上述初步筛选，通过正式的迷宫训练消除不符合（学习）学习标准的大鼠。这是因为某些大鼠有学习和记忆障碍。但是，仅前两个屏幕很难找到。严格来说，第三种筛选方法是*详尽的方法，但是该方法只能在进行实验性治疗（建模或给药）之前测试大鼠的记忆保持（生殖）能力。所有选择的大鼠都通过了学习测试。

　　2、学习测试无论采用以下哪种方法进行学习测试，其共同点是将大鼠置于迷宫中并在开始正式实验前适应3-5分钟。

　　（1）随机休息方法：安全区域以不规则的顺序变化，并且训练动物区分各个方向的光刺激和安全性。在动物通过电击逃逸到安全区域后，灯光将继续工作10到15秒。灯熄灭后，一个测试结束，将动物的手臂用作下一个测试的起点。两次测试之间的间隔为30秒，其余时间在第二次测试之前一分钟。重复该过程，直到测试达到连续的9/10标准。

　　（2）随机不间断方法：安全区域按不规则顺序更改。首先，给动物的手臂和另一只手臂通电。在电击中动物逃逸到明亮的区域后，在一次测试中将其保持10或30秒，然后以动物的手臂为下一个测试的起点。测试。

　　（3）顺序法：依次使用3臂末端区域作为I-II-III-I臂的起始区域或安全区域。以上具体方法可进一步分为两类：①每天固定训练时间，通常为20次，连续训练3-4天，动物一般都能达到学习标准。 ②采用非固定训练时间，分段连续训练的方法。每隔10次训练休息1分钟，然后继续训练直至学习。培训将在一天内完成。通常，*种方法使用更多。

　　（六）记忆力保持（再现）测试

　　学习测试24小时，48小时，7天，30天，9/10标准使用相同的方法。正确的响应数设置为A，A/10表示内存保留，值越高，内存越好。