动物造模,猴脊髓半横断损伤模型 中国实验动物信息网 2022-02-02 814

　　1.实验目的

　　每年，许多中国患者都会遭受严重的后遗症，例如由SCI引起的瘫痪。脊髓损伤后如何再生神经细胞和神经纤维以及恢复多少功能是非常重要的问题。近年来，人们进行了大量的实验研究以探索修复脊髓损伤的机制，但到目前为止，在各种动物实验中对脊髓损伤的评估已大不相同，并且没有*理想的脊髓损伤。模型。为了提高实验的应用价值，作者建立了以非人灵长类猕猴为实验动物的成年恒河猴脊髓半切损伤模型，以修复和修复脊髓损伤，以备将来临床应用。已经研究了再生机理，并提供了一些基础。

　　二。实验材料和方法

　　1.实验设备YXQ.SG41.280A电热压力蒸汽灭菌器； HT-200微型电子天平； 8KFG-01电热恒温鼓风干燥箱；电蒸馏水仪； 20μl，100μl，200μl， 1000μl可调微量进样枪； 80°C低温冰箱； -20°C BD-618卧式冰柜； AMBZ-5-P实验室级专用超纯水机；手术器械：Kerrison钳，眼科剪刀，解剖剪刀。 ，蚊子钳，有齿镊子，无齿镊子。

　　2.实验材料八只成年恒河猴，雄性和雌性，约2岁，体重3.5-4.5公斤（由昆明医科大学实验动物中心提供），随机分为两组：假手术组并进行脊髓半切组，每组4个。

　　3.具体的实验方法和操作步骤

　　（1）建立脊髓半切模型：氯胺酮（50 mg/kg）和地西epa（1.5 mg/kg）结合麻醉动物肌肉注射，俯卧进行固定，并定期准备皮肤，消毒并涂毛巾。在T10棘突周围做一个大约5厘米长的中央切口，逐层切开背部的皮肤，皮下组织，胸大肌和背部筋膜，切开脊柱旁肌肉的棘突附件，并使用一个玉米棒剥皮器。剥除椎骨下椎骨从辅助肌肉到关节的过程充满了干纱布以止血。自动牵开器收缩椎旁肌，清洁椎弓和棘突旁的剩余软组织，切开T10棘上韧带和棘突间韧带，切开Tm棘突，并去除黄色韧带。切开并用Kerrison镊子将脊髓暴露，打开椎弓。

　　去除硬脑膜和蛛网膜。在手术过程中，可以看到脑脊液引流和正常的脊髓搏动。脊髓的特征是后中位血管。锋利的尖锐刀片从脊髓的后内侧裂隙快速撤回到脊髓左侧的开口和部分脊髓组织。相似地，假手术组中，将左1mm的脊髓依次切开，在手术后断续地缝合硬脑膜，将肌肉层和皮肤分层缝合，并切蒂。但是，请勿打开硬脑膜。手术后，给予80万单位青霉素钠作为静脉输液，以防止感染，加强控制和预防并发症。

　　（2）行为观察：术后24小时，1个月，2个月和3个月观察后肢的随意运动，肌肉力量和肌张力的变化。根据Tarlovscale评估脊髓损伤后的后肢肌肉强度。

　　3.实验结果

　　行为观察：假手术组伤后24 h，双解剖脊髓组后肢的肌肉强度均为3级，半解剖脊髓组左后肢的肌肉强度为0级，肌张力下降。表现为延迟性麻痹，右肌力量为3级。受伤三天后，假手术组的后肢均恢复正常。受伤后五到七天，另一只后腿的肌肉力量恢复正常并能够支撑体重。受伤后第十四天，半截肢后肢的肌肉量减少，表现为左后肢痉挛性麻痹。受伤后一个月，脊髓同侧后肢的肌肉强度为2级；受伤后3个月内，左两个后肢的肌肉强度为3级。 ，其余均为4级，带有主动握把和部分负重。

　　4号。结果分析

　　在这项研究中，通过切断成年恒河猴的左T11脊髓观察后肢的功能变化。手术后，左后肢的运动功能可能会完全丧失，并在14天内部分恢复。几个月后，横向力量就受伤了。在主动抓地力和部分负重的情况下，得分达到*高。脊髓单侧横断的皮层体感诱发电位（CSEP）结果显示，P1潜伏期延长，P1-N1振幅显着降低，表明感觉传导通路受损。我会。孟小梅等。 （2002年）表明成年猴脊髓半切后体感诱发电位的变化与后肢运动功能密切相关，这表明脊髓损伤后后肢运动功能的间接和客观指标。结果表明。对人体正常运动的控制反映在神经系统各个层次之间的微妙而动态的平衡中。严重或完全脊髓损伤后，许多动物可在脊髓损伤的下部重现后肢运动。受伤后，脊髓逐渐获得部分运动控制。能力。这些研究表明运动控制可塑性可能是由于损伤部位下方脊髓内源性神经元网络的重塑所致。此外，许多学者认为半解剖对侧侧棘芽也是促进神经可塑性的重要因素。换句话说，它们在脊髓损伤后具有一定的自我修复能力。作者采用后入路急性脊髓半切口模型，将半切口侧与对侧比较，选择类人恒河猴作为实验动物，并进行锐利的层状切口以减少术中损伤。采用该方法观察脊髓受压后后肢神经功能的变化，建立稳定，可复制的非人灵长类猕猴恒河猴脊髓半切模型。所需的设备简单，易于操作，可重复生产且具有良好的可控性。通过运动评分，体感诱发电位和组织形态学研究，从行为上证实猴子实验性脊柱功能障碍后，神经功能可能会自发恢复。损伤后脊髓功能的这种有限的可塑性可能会导致保护性的身体自救，而确切的反应机制需要进一步研究。