CAR-T细胞,基因编辑 中国实验动物信息网 2020-09-30 474

　　在一项新的研究中，宾夕法尼亚大学和斯坦福大学的研究人员结合了两种**的方法-CRISPR（DNA编辑）和T细胞疗法（使用免疫系统哨兵摧毁肿瘤）。  ---一起开启了癌症免疫疗法快速发展领域的新篇章。他们报告说，两名年龄在60岁以上的女性和一名男性患有肉瘤，另外两名患有血癌，称为多发性骨髓瘤。去年，三名患者接受了他们自己的CRISPR基因编辑的免疫细胞疗法。

　　对于这三名患者，受益是有限的。一个人死亡，另外两个人变得更糟。但是，该论文的通讯作者，宾夕法尼亚大学的癌症研究人员卡尔·朱恩（Karl June）表示，长期以来对该临床试验的监管审查并不旨在治疗癌症。目的是证明该策略是可行且安全的。就这一指标而言，科学家们认为它是成功的。加州大学伯克利分校的基因组编辑费奥多·乌尔诺夫（Fyodor Urnov）说：“这是决定性的转折点。”他说，这项研究是美国*个回答“显然困扰这一领域的问题”。

　　这些研究人员将CRISPR与另一种将新DNA整合到免疫细胞中的策略相结合。 June和他的团队在2010年向三名慢性白血病男性患者的T细胞中添加DNA并将这些T细胞注射到同一患者中时，帮助制定了这一策略。治疗结果值得注意：这两名男性患者仍然健壮。其他人正在测试称为CAR-T细胞疗法的相同方法-将嵌合抗原受体（CAR）基因导入T细胞，可使这些T细胞灌注患者结合并破坏。在表面表达特定蛋白质的癌细胞。制备CAR-T细胞的过程通常需要4-6周。如今，已经批准了两种CAR-T细胞疗法用于治疗白血病和淋巴瘤患者。

　　但是，随着时间的流逝，这种疗法的局限性逐渐受到关注。宾夕法尼亚大学治疗血液癌症论文的*作者爱德华·斯塔特莫尔（Edward Statmauer）说，并非所有癌症患者都会受益，即使受益者也会复发。实体瘤如脑瘤和胰腺瘤已被证明难以治疗。

　　人们想要使用CRISPR敲除选定的基因并添加DNA。这可以使T细胞更坚固，更耐用。但是，CRISPR引入了自己的不确定性。实验室研究表明，存在“脱靶”效应，即意想不到的DNA修饰。没人知道携带这种基因的T细胞是否可以在人类中生存。去年，Vertex Pharmaceuticals和CRISPR Therapeutics宣布，两名接受CRISPR编辑的细胞疗法的遗传性血液病患者表现良好，但没有透露太多细节。

　　6月，Stadtmauer及其同事首次搜索了肿瘤中产生一种名为NY-ESO-1的蛋白质的患者，并添加了编码该蛋白质的基因以从这些患者中提取。的T细胞。这些患者还需要携带某些类型的人类白细胞抗原（HLA）。它是一种免疫蛋白复合物，可帮助T细胞在患者体内灌注和繁殖。所有四名符合条件的患者都病得很重，并且经常接受这种新疗法。一名女性多发性骨髓瘤患者接受了三例骨髓移植。另一位三十多岁的肉瘤女性患者患病，无法在实验室接受转基因T细胞疗法，死于临床治疗。为了促进这些患者的T细胞抵抗疾病，这些研究人员使用CRISPR敲除了两个编码所谓T细胞受体（TCR）的基因。我们还减弱了第三个编码PD-1蛋白的基因。 June研究小组推测，PD-1可能会阻断免疫反应，而去除PD-1的作用可能会增强T细胞功能。随后，他们将编码靶向NY-ESO-1的T细胞受体的不同基因插入T细胞。

　　对这三位患者的深入监测证实CRISPR可以引起一些脱靶变化，包括血液采样以研究体内转基因T细胞。但是，它们很少见，具有这些意外DNA改变的细胞数量会随着时间逐渐消失。令人鼓舞的是，与目前的CAR-T细胞疗法研究（约2个月）相比，这些CRISPR基因编辑的T细胞在体内可持续至少9个月。 June说，影像学研究显示“良好的健康T细胞”，而实验室研究能够在注入患者体内后的几个月内与癌症作斗争。

　　然而，这三例患者的预后并不高。在原发性肿瘤减少的肉瘤患者中观察到*佳反应，但其癌症随后恶化。加利福尼亚大学洛杉矶分校的肿瘤学家安东尼奥·里瓦斯（Antonioivas）说：“这些T细胞不再关闭这些基因，而是开始发挥惊人的作用。”ivas，June和其他人提出了可能的原因，包括为何接受治疗。由于患者人数少，对NY-ESO-1的靶向作用有限（有时具有良好的安全记录），许多T细胞可能无法敲除所有这三个基因。

　　Stadtmauer说：“整个领域充满创意。”包括中国在内的其他临床试验正在为患有癌症和其他疾病的患者提供CRISPR编辑的细胞。在Ribas的支持下成立的PACT Pharma正在利用CRISPR进行针对实体瘤基因突变的临床试验。ibas表示，6月份的研究小组为将CRISPR编辑的T细胞提供给患者提供了“必要的开始”。他补充说：“我是首先这样做的，所以事情会更容易。”