主要侧重于建立运动模型并研究运动对生理学和病理学的影响,以促进运动训练的科学,改善竞技运动表现以及运动疗法在疾病康复中的作用跑步机在实验研究中有越来越多的应用。合理有效的应用程序也是研究运动与代谢,运动与心血管疾病,脑血管疾病,神经系统疾病的工具。
1.实验的目的
使用声音,光和电来刺激大鼠在跑步机上跑步以达到其训练目标。
2.实验原理
跑步机的主要部分是传送带。表面材料有助于动物抓握。通道的后壁配备有刺激电极,声学装置和灯泡,每个通道的刺激器彼此独立。如果动物拒绝奔跑,或者奔跑速度低于实验要求,则将其缩回传送带上,并触摸后壁的刺激器。由于强烈的电或声刺激,动物以跑步机的速度奔跑。
3.实验材料和方法
(1)实验材料
1.实验设备,动物实验跑步机。 2.实验动物和实验组(1)大鼠或小鼠(在本实验中以大鼠为例)。
(2)根据实验目的,将大鼠分为组,通常是训练组和安静对照组。训练组也可以根据不同的训练强度继续进行划分,并为每只大鼠编号。
(3)饲养在另一个笼子里,免费进食,动物室温21-25℃,相对湿度40%-60%,自然光的昼夜节律变化。
(2)实验的具体方法
(1)打开跑步机及其相应的软件,根据数量将老鼠放在相应的轨道中,然后合上盖子。 (2)设置相应的参数,例如时间,速度,电刺激强度,然后单击[开始]。
(3)训练后,移开大鼠,换成另一组动物,其他步骤与上述相同。
(4)每周训练5-6天。全部安排在晚上。
(3)实验操作的注意事项
(1)当选择体重相似的大鼠时,体重相似的大鼠的生理指标没有显着差异。每周称重一次,观察体重变化。
(2)在正式训练之前,需要一段时间的适应性训练,以使老鼠有时间适应。
(3)请小心使用跑步机,以免发生事故,在夹住大鼠尾巴时抬高跑步机,并在跑步后用碘伏消毒。 (4)过度刺激会引起大鼠的生理变化,包括增加肾上腺素。因此,在跑步机实验中,尤其是在电刺激的情况下,应尽可能降低刺激的强度和频率。通常将电刺激调整为0.5-0.8 mA,并且小于1 mA。
(5)老鼠在运动中会消耗更多的食物,因此要补充食物和水,并及时更换垫料。
(6)根据老鼠的生活方式,应尽可能在晚上进行训练。
辅助实验:跑步机训练对脑缺血大鼠神经功能恢复和突触素表达的影响
一个实验目的
在跑步机训练脑缺血大鼠中观察神经元恢复和突触的元素表达的变化。
2.实验原理
许多研究表明,运动训练可以促进脑出血后神经功能的恢复。在该实验中,神经功能评分(mNSS)用于观察跑步机训练对脑出血大鼠神经功能恢复的加速作用。 Western印迹检测用于解释突触素在大鼠恢复过程中的作用。
3.实验材料和方法
(1)实验材料
(1)所需设备:动物实验执行平台,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)。
(2)所需试剂:RIPA裂解物,突触素抗体(来自兔子),第二抗体。 (II)实验的具体方法
1.实验动物和组24只健康成年雄性SD大鼠,体重(250±20)g,7周大(由昆明医科大学实验动物中心提供)。将它们随机分为假手术组,缺血对照组和运动训练组,每组8只动物。将大鼠饲养在单独的笼子中,随意进食,动物室温为21-25°C,相对湿度为40%-60%,自然光的昼夜节律变化。 2.模型准备:通过腹膜内注射3.6%水合氯醛(1ml/100g)将SD大鼠麻醉,然后固定。使用Longa颈外动脉缝合线制备了右脑中动脉闭塞(MCAO)模型。在假手术组中,也插入了线塞,但是深度小于1cm,并且大脑中动脉的血流没有被阻塞。建立模型后,在3天内腹膜内注射20,000 U庆大霉素,以防止感染。在手术后24小时对实验动物进行神经行为评分,并且将评分为2-4的动物包括在实验中。
3.在跑步机训练之后,运动训练小组在第4天以每周10m/min,每天30min的速度,以10m/min,每天20min的速度接受3d自适应训练。 20天正式培训从开始。我们将在星期五的下午6点至晚上8点进行培训,周末总共有4周的假。假手术组和缺血组未接受运动训练。 4.神经功能评分手术后24小时,4、8、12和20天评估三组大鼠的神经系统严重程度评分(mNSS)。*终得分共4项,包括对运动,感觉和反射测试,运动实验,感觉实验,平均束实验,反射丧失和异常运动导致的神经系统损害严重程度的综合评估分数为13-18),中度伤害分数为7-12分,轻度伤害分数为1-6分)。
5.每组的蛋白质印迹法用戊巴比妥钠麻醉大鼠,断头颅,切除右脑的皮质和海马,并在-80℃下保存以进行蛋白质印迹检测。用RIPA裂解缓冲液裂解组织。在水浴中均化后,将其超声处理。在低温下以12000r/min离心15分钟,收集上清液。 BCA法测定蛋白质样品浓度。取15μg蛋白质样品,加入5μl上样缓冲液,在100°C下煮沸5分钟。 100g/LSDS-PAGE75V,蛋白质分离2小时。在350mA下转移到PVDF膜(Millipore)上2小时。将用TBST制得的脱脂乳密封2小时。突触初级抗体(兔来源,1:2000)在TBS中稀释,并在4°C孵育过夜。用TBST将膜冲洗3次,持续10分钟。用TBS(山羊抗兔,1:8000)稀释第二抗体,并在室温下孵育2小时。用TBST将膜冲洗3次,持续10分钟。通过使用化学发光的凝胶成像系统创建颜色和图像。使用β-肌动蛋白作为内部对照,成像后获取图像,测量光密度值,并以靶带与β-肌动蛋白光密度的比率反映蛋白质的相对表达,以进行组间比较。我去了。
(3)实验操作的注意事项
(1)选择重量相同的大鼠,以使测试结果不会有太大变化。
(2)在正式训练之前,需要一段时间的适应性训练,以使老鼠有时间适应。
(3)请小心使用跑步机,以免发生事故,在夹住大鼠尾巴时抬高跑步机,并在跑步后用碘伏消毒。 (4)过度刺激会引起大鼠的生理变化,包括增加肾上腺素。因此,在跑步机实验中,尤其是对于电刺激,刺激强度和频率应尽可能低。 0.8mA,*大1mA或更小。
(5)大鼠在运动中会消耗更多的食物,因此应及时补充食物和水。
(4)获得的实验结果
(1)与缺血对照组和运动训练组相比,假手术组基本没有神经功能缺损。术后20天,缺血对照组和运动训练组神经功能明显恢复,后者恢复效果优于前者,差异有统计学意义(P0.05、表1)。 21-1和图21-1)。
(2)通过统计分析不同组突触素与内部参考蛋白的灰度比,运动训练组和缺血对照组的突触素表达低于假手术组,差异有统计学意义。运动训练后的突触素表达高于模型组(P\u003c0.01),具有统计学意义(P\u003c0.01)。结论:跑步机训练对脑缺血大鼠是神经元改善神经功能评分,上调突触素表达并促进脑缺血,并恢复神经功能。