动物造模,亚慢性毒性 中国实验动物信息网 2020-09-02 654

　　背景：临床上使用的中草药约有12,000种，其中大多数是粗药，中草药的起源和发展是劳动人民的工作经验和医学实践。但是，许多常用草药的安全性和有效性尚未确定。为了确保汉方药品的安全性，有必要进行亚慢性毒性和药物安全性测试。 Jinsei颗粒由混合提取物组成，其中包含一定比例的金色和绿色水果。在早期试验中，金国兰对早期预防和治疗幽门螺杆菌感染有效。金清颗粒用于治疗各种疾病，但是长期使用的安全性仍然值得怀疑。世界上约有10％的人患有胃溃疡，约有1％的溃疡发展为胃癌。因此，金塞颗粒具有很大的市场。在早期的急性毒性研究中，发现大鼠锌蛋白颗粒的中位致死剂量为5 g/kg。  方法：金清颗粒：金国兰和青果的药材都是从成都收集的。金果兰和青果配方中添加了一些辅助成分，制成金青颗粒。将颗粒溶解在无菌蒸馏水中，并以16g/mL，8g/mL，4g/mL和2g/mL的剂量浓度混合。动物：4-8周大的健康雄性和雌性SPF SD大鼠。动物室保持在20-25度的温度和55±5％的湿度。人工照明12-12亮度调节。实验开始前，让大鼠喝水并适应7天。

　　安全药理实验：安全药理实验是根据“兽药管制条例”进行的。将50只SD大鼠随机分为5组（每组5只，雌性5只）。*组，正常对照组（蒸馏水）；第二组，金青颗粒2g/kg；第三组，金青颗粒4g/kg；第四组，金青颗粒8g/kg；第五组，金16g/kg每天上午9点以10 ml/kg的体积喂食颗粒动物7天。从上午10点至下午16点观察了14天的动物行为，姿势，流涎，瞳孔变化，肌肉震颤，头发和粪便。为死者和死者及时进行尸检，以防止动物死后由于体内药物的蓄积而悲惨地进食。在给药完成之前和之后24小时，将大鼠置于全身运动记录仪中，并在环境中适应30分钟。观察大鼠的运动（每分钟的运动次数）并记录运动，以判断中枢神经系统是否正常。杆攀爬测试用于评估多次给药后大鼠的运动能力。*后一次给药后二十四小时，竖起一根光滑的金属棒并将其固定在底部。将鼠标放在金属棒上，使其朝下。他们协调活动的能力分为0级，正常升级，1级，滑行，2级，不挂在杆子上，3级和不和谐时期。在给药前一天，给药后一天和给药后第8天通过腹膜内注射3％戊巴比妥钠进行麻醉。 BL-420F多通道生理信号采集和处理系统可记录动物心率，心电图，呼吸深度和呼吸率。亚慢性毒性研究：将120只大鼠随机分为6组（每组10只雄性和10只雌性）。*组，正常组；第二组，生理盐水对照组；第三组，金清颗粒2g/kg；第四组，金清颗粒4g/kg； V组，金清颗粒8g/kg；第六组，金青冲剂16g/kg，大鼠剂量为10ml/kg。每天上午9点以10 ml/kg的体积饲喂动物30天。为了分析大鼠的死亡原因，有必要对死亡的大鼠进行解剖学分析。每天上午10点至下午16点观察30天的大鼠行为，态度，唾液存在，瞳孔变化，肌肉震颤，头发质地，食物摄入，水摄入，粪便，中毒和死亡去做。每3天记录一次体重。在给药结束时收集所有动物的尿液样品。它可以测量pH，抗坏血酸，比重，血糖，白细胞计数，亚硝酸盐，蛋白质，酮，尿胆素原和胆红素。在装有柠檬酸钠的抗凝管中收集大约2 ml血液，以确定血液学指标。另一个2毫升采血的非肝素化试管用于测量血清生物化学。采血后，处死大鼠以观察可能的病理变化。记录肝脏，心脏，脾脏，肺，肾脏，脑，卵巢和睾丸的重量。根据以下公式计算器官的相对重量：器官系数=器官重量/体重x 100％。浸泡在10％福尔马林缓冲液（pH 7.4）中3天，脱水，包埋，切片，去石蜡和HE染色。尼康80i光学显微镜可评估病理变化。 结果：安全药理实验：在安全药理实验中，没有死亡发生，并且所有组中的所有动物都没有异常的皮毛，姿势，运动，粪便，流涎和肌肉震颤。 ..受中枢神经系统控制的行为，例如姿势，瞳孔大小变化，流涎，步态和肌肉震颤均未异常。每个剂量组的金清颗粒动物活动指数的不同指标没有差异。金精颗粒对大鼠的自发活动无明显作用。在极点攀爬测试中，治疗组和对照组的大鼠均降到0级。已经证实，金清颗粒对动物协调性没有明显作用。用药前，用药当日和用药后第8天测得的心率和呼吸频率在对照组和金清颗粒剂量组之间无显着差异。同时，同一组在三个不同时间的心率和呼吸率没有显着差异。因此，可以得出结论，金清颗粒对大鼠的心血管和呼吸系统无明显影响。该图显示了金呼吸颗粒对大鼠呼吸时间的影响曲线。亚慢性毒性研究：在一项为期30天的管饲研究中，有6只雄性动物死亡，其中2只雄性大鼠和1只雌性大鼠死亡。这些动物的尸检结果表明，由于管饲后不适而死亡。口服金清冲剂无副作用。在每个治疗组中，在动物的毛皮，运动，姿势，瞳孔变化，饮食，流涎，肌肉震颤和粪便中均未观察到异常。该表显示了食物和饮用水的消耗量。饮水对照组与口服金清颗粒组之间无明显差异。除16 g/kg的消费量略低（VI组）外，其他各组之间无显着差异。体重增加对照组（I组）和生理盐水组（II组）之间没有显着差异。 III-V组之间的体重增加没有显着差异（口服2 g/kg？8 g/kg金青颗粒）。与对照组相比，VI组（口服16 g/kg金清颗粒）的雄性大鼠体重减轻了一些。从第19天到第31天，第六组雌性大鼠的体重增加类似地减少。尿液样本中的指示剂显示抗坏血酸的高阴性率为90％。所有动物的pH值，比重，血糖，白细胞和亚硝酸盐均正常。与对照组相比，VI组（口服16 g/kg金清颗粒）的胆红素值略有增加。隐血，蛋白质，酮体和尿胆素原水平略有增加，但未达到统计学意义。除VI组（口服16 g/kg金颗粒）外，淋巴细胞计数略高，其他剂量组无显着差异。血清生化指标，VI组（口服16g/kg金清颗粒）仅增加了天冬氨酸转氨酶和总胆红素，其他组无明显差异。只有VI组（口服金青颗粒16 g/kg）的肝和卵巢器官值略高，其他组没有显着差异。拍摄每组的三只大鼠的心脏，肝，脾，肺，肾，胃，肠，脑，睾丸，卵巢的组织病理学照片。剂量为16g/kg的金青颗粒的动物表现出组织损伤。每组均具有完整的胶囊，心室和心室肌轮廓，没有明显的病理损伤。与对照组相比，VI组的动物具有扩张的肝正弦曲线，并且肝细胞的液泡变性程度不同。在脾脏中，对照胶囊完整，白色和红色浆液清楚地分开，并且淋巴细胞计数正常。与对照组相比，VI组大鼠淋巴细胞减少，巨噬细胞数量增加。每组的肺组织完好无损，所有支气管（*、第二和第三支气管）均放置良好。肾组织无明显病理变化。肾囊完整，皮质和髓质明显分化，肾小管和收集管排列整齐，密度正常。第1-6组的单层柱状上皮，粘膜肌肉层和适当的肌肉层的结构已完成。肠粘膜，粘膜下层，肌肉层和外膜层的结构完整。大脑中的神经纤维层，大脑皮层和海马锥体细胞放置良好，没有炎性浸润或出血。在卵巢组织中，与对照组相比，*组至第六组的卵巢原始卵泡，增生卵泡和成熟卵泡的形态和数量均正常。睾丸的生精小管结构完整，睾丸的精子细胞排列整齐紧凑。与对照组相比，第六动物组的曲细精管中的精子数量减少了。

　　结论：高剂量金清颗粒（16 g/kg）对大鼠的安全药理学和亚慢性毒性研究表明，动物神经系统，心血管系统，呼吸系统，肾脏系统和血液它对系统几乎没有毒性。*高剂量导致动物增重变慢，组织学变化变小，生精小管精子数量减少以及血清天冬氨酸转氨酶和胆红素增加。在一项为期30天的喂养研究中，有3只剂量为16 g/kg的大鼠死亡。这可能是由于管饲损伤而不是药物毒性引起的。 SD大鼠以8 g/kg或更少的安全颗粒剂量口服金青颗粒30天，但事实证明更高剂量并不安全。