动物实验 中国实验动物信息网 2020-09-02 797

　　背景：视频胸腔镜手术（VATS）已被用作执行各种胸外科手术的诊断和治疗平台。包括手术肺活检，肿瘤分期，气胸，心包和心包开窗治疗。临床上已经认识到，VATS比传统的开胸术更没有痛苦和压力。*近的报告也证实了VATS的安全性和益处。动物模型在外科手术过程中通常与人类模型相似。对猪进行了实验性肺切除。在犬中，已报道了胸腔镜肺叶切除术对原发性肺部肿瘤的短期影响。对动物进行的VATS程序的多项研究评估了压力参数和术后结果。为了进一步探讨微创手术对急性期反应，应激反应和术后疼痛的影响，我们设计了一项猪临床试验，比较了VATS和开胸手术的可行性和安全性。方法：动物：14只巴马小型猪，平均体重为22.57±1.5千克。猪被放在一个笼子里，温度恒定（约20°C），光照条件良好（光照/黑暗周期为12小时），可以自由进食。所有动物在手术前都要接受健康评估，体格检查和全血细胞计数。将动物随机分为两组。*组进行胸腔镜全肺切除术，第二组进行胸腔镜全肺切除术。 手术准备：确定术前基线生理参数，例如血液常规，心率（HR），直肠温度，血清C反应蛋白（CRP），血清淀粉样蛋白A（SAA），白介素（T = 0）-6（IL-6），皮质醇浓度。 禁食24小时和禁食2小时后，对所有猪进行相同的全身麻醉和监测。手术前，每头猪分别注射硫酸阿托品（0.04mg/kg）和肌内注射头孢唑林（20mg/kg）。肌肉内注射甲苯噻嗪（1 mg/kg）和盐酸氯胺酮（10 mg/kg）诱导全身麻醉，并通过1.5-3％的异氟烷氧管插管维持麻醉。用呼吸机和呼吸麻醉机继续呼吸（呼吸频率12次呼吸/分钟，潮气量15-20 ml/kg，吸入：呼气比= 1：2）。所有程序均使用无菌仪器。监测器监测生理参数。动物放在它的背上。手术部位（从锁骨到左胸部的*后一个肋骨，从胸骨到脊柱）被剃毛并无菌地准备进行手术。在动物和手术台之间放一块加热的毯子。在同一环境中，所有手术均由同一位经过培训的兽医进行。

　　视频辅助胸部手术：创建两个门户：内窥镜门户（门户1）和外科门户（门户2）。门1（直径1厘米）位于金属管内部，由第8和第9肋之间的套筒形成。门2（直径2-3 cm）由手术刀和高频电灼形成，位于第5和第6肋之间。将10/11毫米的套管针套管穿过胸壁插入门脉1、内窥镜（0°，直径10毫米，长度330毫米，奥林巴斯）连接到视频内窥镜摄像机和光源（奥林巴斯），并通过该套管进入胸腔。使用电凝止血刀止血门的末端2、肺部抓钳用于提起肺叶以暴露肺门。使用止血钳和自制工具小心地分开肺动脉，肺静脉和支气管。电灼用于分离多余的组织。夹住肺动脉和静脉并使其横切，然后将支气管横断然后再结扎。支气管结扎需要额外的穿透缝线。左胸部按以下顺序切除所有肺叶：中叶，上叶和相邻的下叶。用注射器在胸腔内用生理盐水（约200 ml，约40°C）检查支气管结扎，并用真空吸尘器吸液体。

　　胸部手术：用手术刀和电凝刀在第7和第8根肋骨之间切开8-10厘米的切口。切掉第8根肋骨以改善工作空间和视野。使用高频电刀进行凝血。使用伤口扩张器扩大手术区域。操作步骤与胸腔镜检查组相同。

　　监视和术后护理：所有动物均在同一环境中饲养和监视。每天连续15天对猪的临床症状进行评估，包括精神状态，运动，食欲，大便外观和伤口愈合，包括出血和炎症的存在。麻醉后，将动物放在温暖的房间中，并在6小时后转移到猪圈中。手术后6小时没有饮用水，手术后18小时给猪喂食。

　　手术后，每3天给予5mg芬太尼贴剂，连续6天。抗生素预防，连续2天每天两次肌肉注射头孢唑林钠（50 mg/kg）。记录以下参数：HR，直肠温度，手术时间，切口大小，术后并发症，站立时间。手术前以及手术后第1、2、3、5、7和14天的血液检查，包括白细胞（WBC），红细胞计数（EC），淋巴细胞（LY）和粒细胞（Gran）计数在制作从前腔静脉（术前1、3、5、7和14d，术前和术后4小时）采集血样，并以1000g离心15分钟。在-80°C下储存的血清中的生物标志物进行分析，并使用商业化的ELISA试剂盒，在手术前，手术后1、4、3、5、7和14天分别给予特异性单克隆抗体。在眼中测出的CRP，SAA，IL-6、皮质醇。手术后十五天，用甲苯噻嗪和盐酸氯胺酮麻醉猪，然后通过静脉注射300mg利多卡因使安乐死。进行尸检以检查胸腔和术后顺应性。 结果：所有动物均在手术后14天存活。胸腔镜和开胸手术成功完成了全开胸手术，并完全清除了所有14个左叶。胸腔镜手术的时间明显长于开胸手术（VATS 160.6±16.2 VS开胸手术123.7±13.2、P \u003c0.05）。两组动物没有围手术期或围手术期并发症。没有可引起出血或医源性创伤的手术器械。 VATS组的皮肤切口长度为4.5至5.5 cm，开胸组的皮肤切口长度为8至10 cm，两组均未观察到其他异常情况。手术后24小时，所有猪均恢复到正常活动水平。在手术前（基线），指定手术期间和术后时间点测量直肠温度。所有动物的直肠温度均降低。 VATS组的两只猪和开胸手术组的四只猪在手术后1天和2天。发高烧后，他在手术5天后恢复了基线。两组分别在手术后1、2和3天白细胞计数显着升高（P \u003cu\→ c\→），并在手术后恢复正常。手术后红细胞计数无明显变化。术后*天淋巴细胞和粒细胞均显着增加。术后5天淋巴细胞计数恢复正常水平，术后第7天粒细胞计数恢复正常水平。两组动物在手术后4小时，1天和3天的血清CRP水平明显升高。 7天后，它逐渐下降至基线。术后*天，胸腔镜检查组的CRP显着低于开胸手术组。手术后第1天和第3天，第2组的血清SAA水平显着升高。 7天后，它逐渐下降至基线。开胸手术组的SAA通常高于VATS组的SAA，但差异不显着。两组之间在任何时候都没有统计学上的显着差异。两组动物在手术后4小时，1天和3天的血清IL-6水平显着高于术前水平。 5天后，它逐渐下降至基线。术后第1天，胸腔镜组的IL-6水平明显低于开胸术组，两组之间无明显差异。两组的血清皮质醇水平显着高于手术前，并在手术后5天逐渐下降至基线。术后4小时和手术后*天，皮质醇明显高于术前水平。术后4小时和*天，VATS组的皮质醇水平显着低于开胸手术组。在其他时间点，两组之间的皮质醇含量没有显着差异。

　　结论：使用微创外科手术技术（VATS）可以减少猪的急性期反应，手术压力和术后疼痛。胸腔镜手术是猪乳房手术的理想选择。