动物实验,CRISPR/Cas9 中国实验动物信息网 2020-08-27 860

　　CRISPR/Cas9是一种强大的遗传魔术剪刀，具有巨大潜力，可以有效纠正引起疾病的突变。通过研究，研究人员首次开发了双基因疗法。它可以将CRISPR/Cas9介导的基因靶向系统的主要成分转运到小鼠体内，以治疗B型血友病（血友病B）。 IX因子缺乏症，该疾病通常是由凝血蛋白缺乏或缺陷引起的。在许多单基因疾病中，例如血友病，研究人员经常需要开发可使用的载体，因为不同的突变而非单个显性突变通常散布在特定的基因中。有。对于突变患者，这项研究是概念验证研究。研究人员使用通用的CRISPR/Cas9基因靶向方法来治疗大多数患有特殊疾病如血友病B的患者。根据美国疾病预防控制中心（CDC）的数据，出生时血友病的发病率为5,000分之一、目前美国大约有20,000名血友病。

　　James MWilson指出，他基本上可以治愈老鼠。为了证实这种新方法，研究人员在缺乏凝血因子IX的小鼠模型中进行了实验。它可以表达由肝脏特异性启动子驱动的SaCas9基因，因此可以在肝脏中安装基因编辑工具。肝脏是血凝因子IX产生的地方。第二个载体不同于以前的基于CRISPR的基因疗法。它包含一个特异地靶向IX基因外显子2的5'末端区域和IX cDNA序列的RNA序列，大大提高了该方法的潜力和准确性。研究人员使用了与腺病毒相关的载体将这些成分传递给小鼠肝细胞。此策略基于CRISPR介导的同源重组，可将人cDNA插入小鼠基因组的IX位点。 Wang研究人员指出，靶向插入可以在天然小鼠IX因子启动子的控制下诱导嵌合活性IX因子蛋白的表达。结果表明，向新生和成年基因敲除小鼠注射的两种载体的剂量增加导致稳定因子活性的持续表达超过4个月。经过8周的载体治疗后，新生和成年基因敲除小鼠小鼠亚组进行了部分肝切除术，并继续表达相同水平的IX因子，但存活下来没有并发症。

　　*后，研究员Wang指出本文的工作表明，使用CRISPR/Cas9技术可以有效治疗B型血友病小鼠模型。当然，该方法有望在人体中进行临床试验。