动物造模,药效评价,视网膜 z-bio 2024-09-03 1473

　　诱发视网膜疾病采用药物或物理的方法，使视网膜结构发生改变，产生类似人类视网膜色素变性疾病。理化因素诱发性的RP疾病动物模型操作较基因修饰RP模型操作简单，效果较明显，在此介绍目前常用的N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)诱导RP疾病动物模型。

　　【造模机制】ENU是一种功能强大的诱变剂， ENU能不依赖于代谢过程，将乙烷基转移到DNA碱基的氧原子或氮原子上。它能使DNA发生较高频率的点突变，使视网膜及视盘发生显现遗传异常。可以诱导Pde6b、Roml、Pax6、Mitf、Egr等基因的突变，引起眼部或者视觉异常。Hart等将ENU用于小鼠发现了7个新的Pde6b的点突变，引起光感受器死亡。ENU诱导Rom1基因突变使外节盘膜紊乱，光感受器细胞变性。

　　【造模方法】ENU诱导RP模型可重复性较好。目前，C57BL/6J、BALB/cAnN小鼠用于造模的频率较高。选用8～10周C57BL/6J雄性小鼠，每周两次腹腔注射85～100mg/kg的ENU。进行眼部疾病筛查后，将具有视网膜色素变性的小鼠在无菌环境下与野生型雌鼠交配，产生第一代(F1)子鼠。将 F1代的雄性鼠与野生型雌性小鼠交配，再将F2代雌性小鼠与F1代雄性鼠回交，获得的F3代小鼠用于大规模眼部筛查筛选，得到遗传性视网膜色素变性动物模型。

　　【模型特点】ENU诱导的Rom1突变3周时与对照组视网膜结构相似，7周时外核层是对照组外核层的1/3，35周时外核层仅剩余1～2层。ENU诱导的Pde6b突变小鼠，通过毛细管电泳以及DNA序列的方法确定基因为Pde6b。Pde6b突变小鼠通过转笼检测到出生后25天～10周存在动态视力。 Pde6b突变小鼠17天视杆光感受器细胞几乎全部死亡。

　　【模型评估和应用】ENU诱导的眼科疾病，除眼底筛查、视功能检查外，需要全基因组筛查，才能确定致病基因。ENU诱导的RP动物模型发生率较高，可重复性较好，但是要得到特定基因的发病率较难预测。ENU诱导的遗传性视网膜色素变性动物模型克服了自发性视网膜遗传疾病可遇而不可求的弊端，可以人为模拟人类遗传性RP疾病提供途径。