动物造模,药效评价,肝衰竭 z-bio 2024-09-02 56

　　(1)模型方法  成年动物，麻醉固定，沿腹中线开腹，在肾静脉上方的下腔静脉上，以5-0血管缝合线做一荷包缝合。自小肠系膜根部找到门静脉后，从肝门部游离至脾静脉水平，结扎切断门静脉侧枝。静脉推注肝素100U/kg体重。于脾静脉水平钳夹门静脉，再于门静脉肝门部分叉下方钳夹、剪断、结扎。将一内被抗凝剂的分流管向下插入门静脉至脾静脉水平之上并结扎固定，向上通过荷包插入下腔静脉，并收紧荷包缝合线。插入下腔静脉前以无损伤血管钳阻断下腔静脉血流于荷包缝合的上、下方。于肝十二指肠韧带中游离出胆总管，然后紧靠十二指肠双重结扎肝十二指肠韧带，以阻断全部入肝动脉。或开腹后，游离门静脉和肝下腔静脉，进行门静脉和下腔静脉的端侧吻合或侧侧吻合，然后在此基础上，闭夹肝动脉。大鼠可直接用血管夹暂时性地夹闭肝动脉，实验犬或猪可在门腔静脉吻合后的24h后行二次手术，暂时性地夹闭肝动脉4～6h。在整个模型制作和实验过程中，连续观察动物的血压、脉搏、神志情况，记录其死亡时间，同时动态抽取血液制备血清作肝功能检测，摘取肝脏组织作形态学检查。

　　(2)模型特点  在入肝血流完全阻断后30～60min，动物开始躁动不安，逐渐进入肝昏迷状态，收缩压随时间延长逐渐降低，75～155h内全部死亡。死亡动物肝脏呈暗红色，无光泽，散布紫色斑块。自入肝血供阻断后，动物血清ALT、 AST、LDH、NH3呈进行性升高，PT逐渐延长，而纤维蛋白原(FIB)和GLU则逐步下降。镜下显示，肝血流阻断后2h，狄氏间隙明显扩张，中央静脉塌陷，肝细胞浆内空泡样变性，细胞核固缩，核仁消失，胞浆内糖原颗粒均质化，粗面内质网脱颗粒，线粒体水肿、部分溶解，细胞核染色质集聚，核变形，核内假包涵体形成；肝衰竭动物肝小叶结构辨认不清，肝细胞排列紊乱，肝板离解，可见灶状和点片状肝细胞坏死。

　　(3)比较医学  急性肝缺血模型是目前比较理想的诱发急性肝衰竭的动物模型，其手术步骤包括门腔静脉吻和及供肝动脉结扎两道程序。其中，供肝动脉结扎又包括彻底结扎和暂时钳夹两种方式。前者指对门静脉和肝动脉行彻底钳夹或结扎阻断术，为完全性血供阻断模型。该模型动物一般死亡时间短，有类似去肝脏模型的特点，属不可逆型，故仅适用于体外生物人工肝支持系统的短期评价，或用于研究与急性肝衰有关的颅内压和脑水肿的变化。后者在行门腔静脉吻合术后，采用钳夹或吊线牵拉的方式暂时性夹闭肝血管，待急性肝缺血导致肝功能出现衰竭后再松解，恢复肝脏的血供，属暂时性缺血性模型。由于吻合术与肝动脉结扎的间隔时间决定了侧支循环数出现的多与少，而后者与动物急性肝衰竭发生的程度及死亡的时间具有明显的相关性，所以，吻合术与肝动脉结扎的时间间隔是该模型制备的关键。因这种模型具有潜在可逆性，故适合较长时间的生物人工肝支持实验与观察。目前，多数生物人工肝动物实验采用此方法，是目前最为理想的外科模型。