动物造模,药效评价,关节炎 z-bio 2024-08-27 217

　　20世纪50年代由细菌学家Freund创立佐剂性关节炎(AA)，又称是弗氏佐剂关节炎，是免疫性关节炎动物模型的基本方法。

　　(1)复制方法  将液体石蜡高压灭菌，BCG 80℃灭活1h，把BCG加入液体石蜡配成10g/L的乳剂，充分碾磨、混匀，即得CFA，于大鼠左后足跖皮内注射CFA 0.1ml致炎。

　　(2)模型特点  原发病变主要表现为早期致炎部位的炎症反应，致炎后18h，左足肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀，继发病变一般出现于致炎后的10d左右，表现为对侧和前足肿胀，且进行性加重，行动不便，耳和尾部出现关节炎小结，变应性角膜炎及体重下降，这些表现接近人RA。用足爪仪测出足爪明显肿胀。MRI检测AA大鼠关节局部病理改变，发现继发性对侧足爪在病程中有两个明显阶段。第一阶段出现于致炎后10～18d，以滑膜炎、滑膜纤维素沉着、关节囊肿胀为特征的关节周围炎症；第二阶段在18～30d，表现为持续性软组织炎症，伴有骨质溶解性骨膜炎、骨膜新骨形成、单核细胞浸润、血管翳形成，关节完全粘连。通过MRI发现的改变与生物化学、细胞学、组织学病程相一致。

　　大鼠AA是以多发性关节炎为特征的、由T细胞介导的慢性全身性免疫性炎症。表现为Ts细胞功能、T细胞致分裂素反应低下，其免疫学指标与CIA稍有不同。AA大鼠血清中蛋白水平与炎症参数(关节肿胀度、IL-6活性等)呈平行改变。血清中结合珠蛋白、黏蛋白、a2-微球蛋白、分泌性蛋白因子-3、a-抗胰蛋白酶、C-反应蛋白等均升高，而激肽释放酶结合蛋白、a抑制因子Ⅲ、载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白 A-Ⅳ、卵清蛋白、转铁蛋白等下降。在类风湿关节炎发病中，内分泌系统分泌的甾体类激素、性激素等以及外周神经系统分泌的去甲肾上腺素或P物质等介质到达滑膜细胞与相应受体特异性结合，通过反馈系统调节局部的炎症过程。交感神经系统分泌的去甲肾上腺素、肾上腺素、内啡肽和甲硫氨酸脑啡肽(Met-Enk)，可以促进RA患者滑膜成纤维细胞IL-6、IL-8的分泌。

　　(3)比较医学  类风湿关节炎是一种慢性、炎性、系统性的自身免疫性疾病。其基本病理改变是滑膜炎，急性期滑膜肿胀、渗出，中性粒细胞浸润，慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳，后者是造成关节破坏、关节畸形、功能障碍，使疾病进入不可逆阶段的病理基础。滑膜的炎症、渗出，软骨的纤维化变性是导致人类类风湿关节炎患者关节肿胀、僵硬、变形的主要过程。

　　弗氏佐剂可免疫多种动物，如大鼠、小鼠、兔、羊等，但其发病率、发病时间及关节炎症状各不相同。即使在大鼠和小鼠间的发病情况也不一样。大鼠或小鼠类风湿关节炎动物模型均与人类类风湿关节炎有许多相似处，但目前还没有一种模型能完全模拟人类风湿关节炎状况。如疾病的开始、关节炎的程度、影响关节的方式及各种附加的临床及系统表现等。不同的动物模型可为类风湿关节炎的病因病理提供独特的研究内容。此外，常用的佐剂性关节炎动物模型的复制方法还有：①四甲基十五烷诱发的关节炎(PIA)，是以体液免疫和细胞免疫异常为特征的血清阳性的实验性关节炎，是由CD4+ T细胞介导，该诱发剂使多克隆T细胞扩增，进一步引起淋巴结病变，浸润滑膜。②佐剂角叉菜胶诱发的关节炎(ACⅡ)，选敏感小鼠，先在皮下注射CFA，在于不同时间在足跖皮下注射角叉菜胶。注射后在DBA/1小鼠表现为足爪和踝关节的肿胀，注射3周后更明显。病理学观察可见皮下充血、淋巴细胞浸润及肉芽肿的形成。该模型主要用于炎性药物的筛选等研究。③蛋白多糖诱发的关节炎，人胚软骨蛋白加在完全或不完全弗氏佐剂中，分3次腹腔注射易感品系(如RALB/c)，4周后可致慢性多关节炎的发生，雌性小鼠较雄性易感，多关节炎的发展、类风湿因子的存在、免疫复合物的沉积，显示这种模型具有一些类风湿关节炎相似的特征。④链球菌诱发的关节炎，来自A群链球菌或其他几种细菌的细胞壁肽聚糖一多聚糖水悬液，单独腹腔注射易感品系大鼠如LEWS大鼠，可诱发严重的侵蚀性关节炎。