动物造模,药效评价,口腔溃疡 z-bio 2024-08-27 203

　　(1)复制方法  首先将透析袋放入0.5mol/L的EDTA溶液中，煮0.5h后弃去溶液，更换蒸馏水再煮3次，然后贮存在含0.01％叠氮钠的蒸馏水中，4℃保存备用。取体重为1.5～2.0kg的新西兰兔，用麻醉方法急性处死后，剥离其口腔黏膜组织，用匀浆器制备匀浆后，超声波震荡，低温离心，保留沉淀物，取上清液再作透析以滤过小分子物质，将大分子蛋白留于透析袋内。透析过程同法反复5次，最后将袋内物质冷冻干燥，获得粉末状蛋白作为抗原，置-70℃低温冰箱备用。取1.5～2.0kg体重的新西兰兔，用预先提取的口腔黏膜蛋白12.5mg溶于0.5ml磷酸缓冲液中，再加入0.5ml的完全弗氏佐剂呈乳化液。在家兔脊柱两侧皮内注射上述组织乳化液1ml，共注射20点。每隔2周同法注射1次，共注射5次。于不同时间切取口腔黏膜作常规病理组织切片光镜下检查。

　　(2)模型特点  造模早期模型兔即开始局部黏膜充血，继而发生溃疡，于第2次注射抗原后的第8日起，动物口腔黏膜均可出现溃疡。溃疡病变多发生在动物的上、下唇，其次是牙龈和口底黏膜。溃疡直径为1～5mm，主要呈圆形或椭圆形，边缘较整齐，其表面覆盖着一层黄色假膜；模型制作过程中溃疡一般2～3d可自行愈合，后又复发。镜下口腔黏膜病理组织学观察显示，黏膜上皮坏死脱落，溃疡表面覆盖有大量中性粒细胞和纤维素样渗出物，溃疡底部小血管扩张充血，并伴有中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润。

　　(3)比较医学  人类复发性口腔溃疡(Recurrent Aphthous Ulcer, RAU)是临床上最常见的口腔黏膜疾病，其发病原因至今尚不明确。近年来大多数研究报道均认为，其与机体免疫(尤其是自身免疫)有关，因此建立理想而合适的复发性口腔溃疡(RAU)动物模型意义重大。由于受到人们对 RAU病因学方面认识的限制，迄今为止临床上尚无治疗RAU的特效药及方法。采用免疫学方法复制的本模型，其疾病发作特点、口腔黏膜病理损伤与临床上人类RAU极其相似，镜下均表现为非特异性炎症。本方法建立的免疫性RAU模型，其制作机制可能是特异性蛋白作为抗原进入机体后，产生了特异性抗体而诱发动物口腔黏膜免疫反应的结果。本模型可用作人类RAU发病机制及药物治疗方面的实验研究。