动物造模,药效评价,肝硬化 z-bio 2024-08-26 87

　　(1)复制方法  成年雄性大鼠，经其腹腔注射30％CCl4石蜡油溶液2ml/kg体重，2次/周，连续7周。或皮下注射40％CCL4大豆油溶液3ml/kg体重，首剂5ml/kg体重，每3d一次，共14次，期间，在实验开始后前2周，饲以80％玉米面和20％猪油混合饲料，2周后在饲料中混入0.5％胆固醇，以30％乙醇作为惟一饮品，连续42d。或皮下注射50％ CCl4大豆油溶液3ml/kg体重，首剂5ml/kg体重，每4d一次，第5次起，改为肌肉注射，共15次，期间饮10％乙醇替代饮水，食常规颗粒饲料，连续60d。或皮下注射60％CCl4矿物油溶液3～5ml/kg体重，每4d一次，共15次，其中头4次剂量为5ml/kg体重，5～11次为3ml/kg体重，12～15次为5ml/kg体重，同时以10％乙醇作为惟一饮用水，连续66d。造模过程中，每日观察动物的一般活动状况，每周称量动物体重，造模结束后抽取全血制备血清、称取部分肝组织制备匀浆作生化检测，摘取肝脾等器官称重，计算脏器系数，并作组织形态学检查。

　　(2)模型特点  模型制作观察过程中，模型动物精神萎靡，食欲不振，嗜睡，易激怒，时见相互间撕咬和攻击，体重先减轻后增加。腹腔注射30％CCl4溶液的动物在造模7周时，其血清丙氨酸转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和肝组织TC、TG、 L-羟脯氨酸(HPA)含量明显上升，血清白蛋白(ALB)含量和白蛋白/球蛋白比例(A/G)显著下降；光镜下全部模型动物肝组织出现纤维化，大部分形成假小叶；电镜下模型动物肝细胞超微结构明显异常，肝细胞呈不同程度的肿胀，部分肝细胞膜破裂，内质网扩张断裂，常见大片脂质空区，线粒体基质电子密度增大，脊消失，肝窦中多见中性粒细胞。皮下注射40％、50％、60％CCl4溶液连续42～66d，动物成活率为46％～77％，肝硬化模型成功率为72％～100％。成模动物正常肝组织被破坏，由广泛增生的纤维组织将原来的肝小叶分割包绕成大小不等的圆形状，形成假小叶。假小叶内肝细胞索排列紊乱，小叶中央静脉缺如、偏位或出现两个以上的中央静脉，再生的肝细胞结节肝细胞索排列紊乱、胞体大、核大、着色深，肝细胞还出现气泡样变和脂肪变性等。

　　(3)比较医学  CCl4是使用最早、应用最广泛的诱导肝硬化动物模型的化学药品。CCl4经肝微粒体细胞色素P450激活生成三氯化碳(CCl3)，后者攻击肝细胞膜结构上的磷脂，引起脂质过氧化，破坏细胞的膜性结构；CCl3还与细胞内蛋白质形成共价键，损害线粒体，使还原性辅酶A(NADH)与三磷酸腺苷(ATP)在肝内生成减少，脂肪酸氧化受到抑制，影响三羧酸循环，致使肝细胞“窒息”死亡；内质网、线粒体、高尔基体，甚至细胞膜的变形和破坏，导致蛋白合成、能量代谢和脂质氧化障碍。三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积，出现脂肪变性，肝细胞坏死并发生纤维化。高浓度CCl4主要累及中枢神经系统，低浓度反复应用则损害肝和肾，肝脏损害－修复－损害最终形成肝硬化。采用CCl4诱导肝硬化模型，通常选用30％～60％浓度作为致模溶液，以大鼠作为造模对象，通过皮下或腹腔注射、灌胃、蒸汽吸入或拌于食物中喂养等各种方法输入动物体内。其中，皮下注射最为常用，但皮下注射由于吸收快速进入全身循环系统，所以对脑肾毒性较大，且注射位置易发生浸润性脓肿和溃疡，其死亡率可高达30％～40％；腹腔注射由于门静脉浓度高，故模型形成时间短，但动物仍呈较高死亡率(20％～35％)；灌胃法可直接将CCl4吸收入肝，但胃肠道反应大，且操作易损伤食管；蒸汽吸入法虽吸收快速，但对呼吸道刺激较强，对中枢系统毒性较大，动物不耐受，且易造成环境污染和实验人员伤害；掺食法由于可将致模药溶于少许食物中快速口服，故可以控制其浓度，或少吃多餐，减小其对胃肠道的刺激，但受动物食欲影响，其实际摄入剂量难以掌握，实验周期长而终点不能明确。