动物造模,药效评价,食管静脉曲张 z-bio 2024-08-26 63

　　(1)复制方法  成年Beagle犬，术前16d时禁食，按10mg/kg体重的剂量肌注氯胺酮麻醉后将动物置于手术台固定。用预先配制好的8％硫化钠脱毛，接心电监护仪监测心电图变化，同时建立静脉输液通路，调整输液速度为60滴/min。静脉注入异丙酚和酚太尼，待肌肉松弛后作气管插管并连接呼吸机，调整潮气量为10ml/kg体重。静脉滴注庆大霉素8万U。脱毛后的手术区域皮肤常规消毒，用手术刀在犬上腹部作长为12～15cm横弧形切口，切口两端分别达两侧第11肋前端。进腹后显露、游离肝下下腔静脉和门静脉主干后，用有创测压仪行门静脉血管腔内测压，肝脏取小块组织活检。准备充分后于右肾静脉平面以上，用5-0血管线行门静脉和下腔静脉侧一侧吻合，吻合口长为1.0～2.5cm。门静脉主干与肝下下腔静脉侧一侧吻合完毕，然后用7号丝线于吻合口上方双重结扎肝下下腔静脉，使下腔静脉系统血流完全转流入门静脉系统。再在肝门处胃冠状静脉入口平面以上部分结扎或缝扎门静脉主干，使其口径缩小至原来的1/3～1/2，然后用7号丝线于结扎或缝扎处环绕门静脉一周，两端穿出腹壁并用1cm长导尿管固定埋于皮下，以备术后收紧丝线时容易寻找。关闭腹壁切口前再次测门静脉系统压力，检查腹腔内无活动出血、胃肠颜色及活力良好后关腹。术后当日补液1000ml，静脉滴注0.4％甲硝唑注射液100ml，庆大霉素8万U。第2日停止补液，开始进少量饮食，逐渐过渡到正常饮食；2～3周后，收紧固定于腹壁皮下的丝线，以扎闭门静脉，阻断门静脉入肝血流，最终复制成功犬食管静脉曲张。模型建立过程中需通过以下方法进行动态观察：手术前、手术后6～8周，腹部超声胃镜检查食管壁厚度和食管旁静脉；术后3～4周，开始每周胃镜检查一次，观察食管静脉曲张形成情况及有无门脉高压性胃病，观察食管黏膜、胃黏膜颜色，有无门脉高压性胃病；术后6～8周，门腔静脉造影，血管显影录像观察。

　　(2)模型特点  术后1～4周，模型动物精神食欲较术前减弱，营养欠佳，体重减轻，8～10周后开始好转恢复，体重增加。术中门静脉压力测定升高极为明显。B超检查肝脏大小形态较术前无明显变化，脾脏难以测量比较。部分可见胃冠状静脉，血流反向。没有腹水。与术前比较门静脉内径增粗，血流速度增快，流量增加。胃镜及内镜超声检查术前常规胃镜检查，犬食管黏膜光滑，无静脉曲张，胃黏膜无充血水肿及溃疡。6～8周时胃镜检查曲张静脉大小稳定，食管静脉形成率100％，胃镜微探头超声见食道壁黏膜层增厚，食道旁静脉、黏膜下静脉增粗。通过手术方法将下腔静脉血流完全转流入门静脉系统，并分两步阻断门静脉入肝血流，克服了手术后门静脉主干闭塞不全的缺点。第一步术中结扎门静脉主干1/3～1/2，第二步在术后2～3周时收紧环绕门静脉主干的丝线，将门静脉主干入肝血流完全阻断，6～8周后可制作成门脉高压症食管静脉曲张的高血流量高阻力犬动物模型。术后犬肝肾功能均正常，肝组织学结构无变化，无肝性脑病发生，无食道曲张静脉出血，无腹水形成。

　　(3)比较医学  本实验通过手术方法阻断门静脉入肝血流，导致门脉系统阻力增高，进而复制成门脉高压症食管静脉曲张的动物模型。本方法的特点在于采用了两步法结扎门静脉主干的技术，使模型复制成功率达100％。但模型的病变程度仍然以轻、中度为主，其主要原因可能与动物在解剖结构上存在的丰富的侧支循环有关。临床上，肝硬化患者由于肝功能受到破坏，液递物质和内脏血流量不断增加，门脉压力处于持续升高状态，因而食管静脉曲张不断加重，破裂出血的比例较高。而本模型虽然实施了门脉主干结扎术，但动物的肝功能和肝脏结构基本正常，门脉系统高压力和高阻力状态不能长期维持，随着门腔侧支循环的建立，门脉高压状态可能会得到缓解，因而很难形成大比例的重度静脉曲张动物模型。尽管如此，本方法所复制的门脉高压症食管静脉曲张模型，由于其具备成模率高、模型稳定等特点，在门脉高压症乃至肝硬化病症研究领域，可作为一种研究手段加以应用。