动物造模,药效评价,食管狭窄 z-bio 2024-08-26 182

　　(1)复制方法  取8～14kg的成年Beagle犬，用戊巴比妥钠按30mg/kg体重的剂量静脉注射麻醉，然后将犬侧卧固定于手术台上，颈部手术区常规消毒剃毛；用无菌手术切开颈部皮肤，游离出食管壁。于犬后腿外侧取大小约为2cm×2cm×3cm阔筋膜1块，在内镜引导下置入食管支架，使其上端定位于颈部游离段食管，将阔筋膜附着于置架部位的食管外壁，用医用不锈钢丝两处缝合固定，一方面可加强食管壁的韧性；另一方面可防止缝线挂穿食管壁。造模手术过程中局部注射少量青霉素，术后模型动物给予半流质饮食饲养，常规饲养条件下观察1～10周。置架期间每天仔细观察模型犬一般情况及体重、饮食变化。模型犬置架部位的食管内径、食管壁各层组织的形态学变化，经定期对模型动物食管作光镜及电镜标本病理组织形态学观察，经结果分析均表现出明显的食管狭窄及形态学改变特征。

　　(2)模型特点  模型动物术后第2日即可恢复饮食，支架术后3周内模型动物饮食量与术前相比无异常，体重也无明显减轻，但活动度较术前明显减少，动物未出现反复呕吐及哽噎的现象。置架3周后模型犬进食量明显减少，开始出现反复呕吐及持续吞咽动作，体重较术前明显减轻，活动度也进一步减少。术后2周模型动物食管组织明显增生，绝大部分支架结构已被增生组织所覆盖，食管黏膜广泛充血、水肿，偶可见坏死、渗出、溃疡，置架部位食管壁明显增厚，支架两端食管壁较管身部分增生更加明显。术后4周模型动物食管组织检查，可见大量增生的组织已完全覆盖于支架内壁并连接成片，支架深嵌于食管壁内，管腔较正常明显狭窄，黏膜仍轻度充血，偶有坏死及溃疡形成。术后8周置架食管的大体形态与4周相似，但增生组织越过支架结构向管腔内广泛延伸，管腔显著狭窄。光镜下观察显示：支架术后1周的食管组织中鳞状上皮明显增生、变厚，细胞层次紊乱，基底层细胞体积增大、胞核深染，上皮基底层与固有层呈交错状态；黏膜下层充血、血管增生、炎症细胞浸润、纤维结缔组织形成，可见散在分布的成纤维细胞。术后2周，鳞状上皮沿支架网眼不规则交错生长，上皮细胞致密、核深染、体积增大，黏膜下腺体明显减少，有大量炎症细胞浸润，成纤维细胞明显增多，纤维组织增生较前加剧，肉芽组织增生明显，肌层变薄。术后4周，上皮形态同术后2周相似，但固有层腺体几乎消失，可见大量纤维组织增生，明显致密，仍可见散在炎症细胞浸润，成纤维细胞明显减少，肌层明显萎缩变薄。术后8周组织的光镜下形态与术后4周基本一致，上皮细胞排列趋于整齐；上皮下纤维组织进一步增多、致密，炎症细胞明显减少。支架上端、中部、下端增生组织的病理变化基本一致。电镜超微结构观察显示：术后1周，食管黏膜上皮基底层细胞胞核体积增大，细胞质内可见大量粗面内质网；上皮浅层细胞间隙扩大。术后2周，黏膜下层可见处于旺盛分泌状态的成纤维细胞，胞核体积较大，内质网丰富。术后4周组织中仍可见活跃的成纤维细胞，细胞突起周围可见散在的纤维束形成。术后8周组织中也可见大量的纤维束形成。

　　(3)比较医学  采用本方法建立的食管狭窄动物模型，由于应用了“自体阔筋膜移植固定法”置入食管支架，经术后1周复查，所有支架均能有效地固定于食管腔内，术后2周内未发生与手术相关的并发症，模型成功率高达100％。手术中采用医用不锈钢细丝缝合，从而避免了断裂的可能；采用自体阔筋膜加固，由于阔筋膜的特性具有以下优点：既能防止挂穿食管壁，又有局部修复作用，同时避免了异物刺激食管壁而引起增生。因此，与其他方法建立的食管支架术后狭窄动物模型相比，本方法复制的“食管支架术后再狭窄”动物模型，具有方法简便、结果可靠、造模周期短、样本消耗少、模型成功率高等优点。但由于造模时需对食管动手术，可引发食管壁局部产生不同程度的创伤性炎症，对模型动物的使用及结果评价有一定的影响。