动物造模,药效评价,脑血管痉挛 z-bio 2024-08-21 162

　　(1)复制方法 雄性小鼠，体重为25～30g。

　　1)SAH的复制  经腹腔注射戊巴比妥钠(60mg/kg体重)麻醉，手术区域皮肤消毒。切开分离右侧股动脉并插管，以备抽取60μl自体血进行颅内注射用(在颅内注射60μl的量时外漏最少，且鼠死亡率最低)。小鼠头部前倾30°，头顶后部正中切口，暴露头骨。选用30号穿刺针从脑后下部中线向左向下45°穿刺进入枕大池。由股动脉抽取60μl自体血(随后腹腔注射60μl生理盐水以补充正常体液量)缓慢注入枕大池，持续时间约1min。当注入20μl时，动物呼吸出现异常，注入到60μl时，可能发生呼吸暂停。注射结束后立即使动物头前倾75°，持续10min，以使血液在枕大池内扩散开来。缓慢抽出穿刺针，创面点滴2～3滴(按2.50×10000U/ kg体重的剂量)庆大霉素，结扎股动脉并抽出插管，仔细缝合切口以防脑脊液和血液外漏。手术期间保持动物体温在37℃。动物于术后1h清醒并逐渐恢复正常摄食，正常术后死亡率<5％。

　　2)脑血管造影检查  可分别于SAH后1, 6, 12h和1, 1.5, 2, 3, 4, 5和7d进行脑血管造影：经左心室插管，以5.5ml/min的速度灌注10％甲醛溶液2min，采用立体显微摄像测量大脑前动脉、大脑中动脉和基底动脉。

　　3)组织学检查  动物先以0.1mol/L的磷酸缓冲液灌洗，随后以4％多聚甲醛和含有2.5％的谷氨酸盐混合的0.1mol/L的磷酸缓冲液灌洗，速度为5.5ml/min。迅速摘除鼠脑并继续固定在上述液体中(4℃)24h，分离大脑前动脉、大脑中动脉和基底动脉，做0.5μm厚度的切片，甲苯胺蓝染色。

　　(2)模型特点  在SAH后2d内大脑前动脉和基底动脉上方、大脑中动脉附近均有血凝块，大脑前动脉周围血凝块最多且清除缓慢，脑顶部血凝块在SAH 3～4d后基本消失。大脑前动脉在SAH后1h开始收缩，其直径可减少30％～40％，并持续1～3d，至第7日时，血管直径逐渐恢复正常。大脑中动脉和基底动脉在SAH后6h收缩达20％～25％，并持续1～1.5d。病理组织学检查可见，在SAH 1d后，血管壁的内弹性层明显皱缩、管腔狭窄、管壁增厚。血管的平滑肌细胞无明显异常。准确的操作可避免脑干、脊髓和小脑的损伤。

　　(3)比较医学  截至目前，还没有一个完全可以模仿人类DCV的动物模型。根据Schwartz的描述，良好的DCV模型应具有：①持续性的蛛网膜下腔出血。②出血量可控。③出血机制酷似血管瘤的破裂。④血液的分布与蛛网膜下腔出血一致。⑤容易操作且价格合理。理想的实验方法应该是直接刺破血管壁，使血液流出。然而此种方法动物死亡率很高。此模型采用直接枕大池注血模拟了血管瘤破裂的方式，血液分布与SAH相似，并引起持续的血管痉挛，病理变化与人类DCV相似。而且具有重复性好、操作简便、成本低、死亡率低的特点。