动物造模,药效评价,静脉血栓 z-bio 2024-08-21 81

　　静脉血栓形成与血流缓慢、凝血因子活性增高及血管壁受损有密切关系。因此，实验性静脉血栓形成模型可通过结扎静脉、中断血流或阻碍血流、损伤血管壁、激活凝血因子等方法而形成。常用的实验动物有大鼠、兔和犬，也可选用猪。

　　1 兔颈部静脉血栓模型

　　(1)复制方法  家兔，体重为2.5～3kg。经耳缘静脉注射戊巴比妥钠(按25～30mg/kg体重的剂量)或20％乌拉坦(按5ml/kg体重的剂量)麻醉。取仰卧位，剪除颈部毛发，手术区域皮肤消毒。于颈腹侧作纵切口，分离颈外静脉，长为1.5～2cm，并分离颅侧属支(颌内与颌外静脉)。分别以无损伤血管夹于颈外静脉近心端及颌内、颌外静脉，在静脉腔充盈状态下暂时阻断血流，用无齿镊夹取静脉壁10次造成机械损伤。随后，经颌内静脉注入凝血酶0.2ml(40U)，拔除穿刺针后结扎颌内静脉并观察15min。见到静脉腔内已有游离血块形成后，开放颌外及颈外静脉腔血流；在颈外静脉近心端先前阻断处，绕以丝线不完全结扎，使血管腔缩小约1/3，以减慢血流。术毕检查周围组织无出血后缝合切口，外敷消毒纱布。术后动物正常饲料饲养，不用抗凝剂及抗生素。

　　可于造模处理后的不同时间(如1d，3d，7d及15d)进行观察检测：①观察实验兔眼结膜水肿情况。②在麻醉下切取造模静脉段标本，作血管外观大体观察，并纵向剖开肉眼观察管腔面及血栓变化情况。③将取材标本固于10％甲醛溶液中待作病理学检查。

　　(2)模型特点  术后兔双侧眼球结膜高度水肿，胬肉肿胀，眼球突出、流泪。造模血管外观紫暗，管径明显怒张，血管壁逐渐增厚。静脉腔内开始血栓充盈整个管腔，呈紫红色，与血管壁无粘连，随时间延长血栓黏附于血管壁并回缩。血管内膜面粗糙、苍白。光镜下可见血管内皮细胞剥脱，内皮下层裸露，至损伤7d以后渐有内皮细胞覆盖至血栓周边表面。血管壁和组织间隙炎性细胞浸润明显。

　　(3)比较医学  此模型是根据血栓形成的三要素，分别造成血管壁的机械损伤、凝血因子活性增高以及减慢血流速度，从而形成静脉内血栓的。由于大鼠等小动物与人相比差异较大，静脉容量小，特别是造模手术过程中，血管壁易发生收缩，血栓形成很少或不易形成血栓，无法系统地观察术后不同时期功能与形态学的演变。兔子的颈外静脉压力较高，血流量较其他肢体静脉充足，血栓形成迅速且充盈整个血管腔，有利于采用溶栓疗法对不同分期的静脉血栓在功能及形态方面的变化进行研究和比较。从术后24h、72h、7d、15d各不同时间的病理演变过程中来看，该模型符合人体静脉血栓形成的病理演变。术后24h、72h、7d时模型动物双眼结膜高度肿胀，眼球突出，多因血栓堵塞静脉管腔，血液回流障碍，代偿功能尚未建立而引起水肿，这与临床上下肢深静脉血栓形成而使患者肢体肿胀的症状相符。如果对球结膜肿胀进行分级或计数测量，可能更有利于实验观察和研究比较。

　　2 下腔静脉阻断血栓模型

　　(1)复制方法  大鼠，体重为250～300g。经腹腔注射戊巴比妥钠(按50～60mg/kg体重的剂量)或水合氯醛(按350～400mg/kg体重的剂量)麻醉后仰卧位固定，剪除腹部毛发，手术区域皮肤消毒。沿腹白线切开进腹，分离下腔静脉，于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉，缝合腹壁，结扎后2～6h重新打开腹腔，在结扎线下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称量血栓干重。

　　(2)模型特点  一般在结扎后3h左右的血栓形成率为60％～80％，结扎后6h血栓形成率为100％。此模型以血栓形成百分率、血栓质量、凝血及纤溶系统为研究对象，多用于研究药物在体内抑制血栓形成的作用及机制。

　　3 股静脉阻断血栓模型

　　1.兔模型

　　复制方法  家兔，体重为2.5～3kg。经耳缘静脉注射戊巴比妥钠(按25～30mg/kg体重的剂量)或20％乌拉坦(按5ml/kg体重的剂量)麻醉。仰卧位固定，剪除双侧股部毛发，手术区域皮肤消毒。股内侧纵向切口，钝性分离皮下组织及肌肉，游离其双侧股静脉2cm，远、近心端用血管夹阻断12h后，去除血管夹。经造影证实血栓形成后，可给予溶栓治疗。获取造模后不同时期血栓形成的股静脉段，通过检测静脉通畅度、有无附壁血栓、静脉壁平滑肌肌动蛋白、胶原沉积、内皮细胞损伤、炎性细胞浸润，以及用扫描电镜观察，评估平滑肌增生、内皮细胞损伤的情况，以研究溶栓治疗对静脉血栓形成急性期血管壁炎性反应和静脉壁形态变化的影响。

　　2.犬模型

　　复制方法  实验犬，体重为15～30kg。按30mg/kg体重的剂量静脉注射戊巴比妥钠麻醉后，仰卧位固定，剪除一侧股部毛发，手术区域皮肤消毒。股内侧纵向切口，分离股静脉约2～3cm，结扎其近、远心端，48h后松开结扎线。血栓形成模型制作成功率为97％～100％。通过观察静脉通畅度、有无附壁血栓、胶原纤维的沉积、平滑肌肌动蛋白的表达、内皮细胞损伤程度等，研究和比较导管直接溶栓和系统性溶栓对急性深静脉血栓形成后静脉壁形态学的影响及近期疗效。

　　3.股静脉异物血栓模型

　　复制方法  实验动物可选用犬和家兔。动物麻醉后，备皮消毒。沿股静脉走向切开皮肤，钝性分离皮下组织及肌肉，充分暴露股静脉，于其近、远心端分别用血管夹夹闭血管，向近心端插入螺旋铜丝(可自制)，缝合血管，确定血管再通后，逐层缝合。造模原理系局部血液淤滞、缺氧，损伤内皮细胞，加之插入异物(铜丝)，启动内、外源性凝血机制，促发血栓形成。

　　4.股静脉电刺激血栓模型

　　复制方法  健康大鼠，体重为250～300g。先给大鼠肌注地塞米松磷酸钠注射液(按1mg/kg体重的剂量)，1次/d，连续7d。第8日行股静脉造栓：大鼠麻醉后，仰卧位固定，剪除一侧股部毛发，手术区域皮肤消毒。行股内侧纵向切口，游离股静脉主干长约1.5cm，将实验性体内血栓形成测定仪的正、负电极分别置于股静脉的远、近心端，接通直流电(1.5mA)，持续刺激7min。原理是应用糖皮质激素导致血液高凝状态，加之电流刺激形成血栓。根据血栓湿重及血液纤溶指标的变化，探讨药物抗静脉血栓形成的药理作用。