动物造模,药效评价,大肠杆菌 z-bio 2024-08-19 161

　　通常小鼠对野生型EHEC O157：H7的感染都不敏感，IQI、 BALB/c、KM鼠等品系的成年鼠对O157均不易感，10的10次方EHEC O157 EDL933W(NalR)活菌的剂量接种离乳小鼠不能引起明显的感染症状。因此除使用细菌感染外，还要同时使用药物辅助，提高动物的敏感性，才能复制出人类感染EHEC的部分症状，可用于抗O157： H7疫苗的初步筛选。

　　(1)方法：口服接种细菌(该菌株为萘啶酮酸抗性菌株)，灌胃前禁食12h。接菌后12h恢复饮食。接种同时腹腔注射丝裂霉素(2.5mg/kg)，并于饮水中加入萘啶酮酸(50μg/ml)。

　　(2)感染剂量：10的9次方～4×10的9次方个活菌/只。

　　(3)结果：受感染小鼠3～4d发病，死亡。此种模型能够复制出较经典的O157：H7感染的组织病理学变化，包括固有层的出血和水肿，结肠活检标本显示中性粒细胞浸润，但病变并不严重，没有A/E损伤，也未引起腹泻或结肠炎，应该不是引起小鼠死亡的直接原因。实验中EDL933W能够引起小鼠肾实质细胞的损伤；肝细胞呈重度的颗粒变性和水泡变性，肝小叶中央静脉周围的肝细胞变性更为严重；而肺组织的病变最为明显，肺泡壁毛细血管高度屈曲扩张，含有大量红细胞，肺泡腔内含有粉红色浆液和少量红细胞，局部肺组织出血，部分肺泡呈代偿性肺气肿变化，支气管周围可见较为典型的大肠杆菌肉芽肿，有大量上皮样细胞和炎细胞浸润。可能原因是小鼠肺脏存在更多的Stx受体Gb3。

　　在接种细菌的同时腹腔注射丝裂霉素(2.5mg/kg)，并于饮水中加入萘啶酮酸。丝裂霉素的作用于环磷酰胺相似，能够引起白细胞和血小板的下降，且EHEC O157是溶源菌，丝裂霉素能够增加Stx2噬菌体的释放，从而增加EHEC特征性毒力因子类志贺毒素Stx的生成量。萘啶酮酸的作用是抑制肠道中的正常菌群，使EHEC O157 EDL933 W(NalR)在肠道中成为优势菌群。如果使用经口或胃内感染EHEC，通常需要事先使用链霉素清除动物肠道内的正常菌群，从而允许EHEC的链霉素抗性菌株在肠道内的定植。这种方式感染 EHEC的小鼠肾出现肾小管坏死的损伤。另外小鼠模型还曾用于研究Stx的经口和非经口的 EHEC感染。腹腔注射Stx1或Stx2可引起结肠黏膜坏死和出血，多种组织内的淋巴坏死和肾中毒性肾小管坏死。